地氟醚和丙泊酚对小鼠中枢及外周组织生物钟基因的影响

发布时间：2020-04-21 07:14

【摘要】：目的:1.研究气体全麻药物地氟醚对小鼠中枢及外周肾脏、肝脏组织时钟基因表达量的影响及其作用机制;2.研究静脉全麻药物丙泊酚对细胞时钟基因整体生物钟的影响;方法:1.用不同浓度(3%,4%,6%,7%,9%)的地氟醚麻醉C57BL/6J(C57)小鼠,通过翻正反射确定地氟醚的有效作用浓度。2.将C57小鼠分为空气对照组和地氟醚实验组,实验组在ZT2时用前述确定的地氟醚浓度(7%)处理,对照组同时通入空气,2小时后采用qPCR检测各组小鼠下丘脑、肾脏和肝脏组织时钟基因Per1、Per2、Dbp、Bmal1、Clock和Cry1表达量的变化。3.提取待鉴定基因型小鼠的DNA,进行PCR鉴定。反应产物加入琼脂糖凝胶电泳检测。4.将Per1~(-/-)/Per2~(-/-)小鼠分为空气对照组和地氟醚实验组,实验组在ZT2时用前述确定的地氟醚浓度(7%)处理,对照组同时通入空气,2小时后采用qPCR检测各组小鼠下丘脑、肾脏和肝脏组织时钟基因Dbp、Bmal1、Clock和Cry1表达量的变化。5.将U2OS细胞的DMEM培养基更换为XM培养基,根据丙泊酚终浓度梯度(1.5μM、6μM、12μM、50μM),各皿分别加入对应体积的丙泊酚,对照组加入等体积PBS溶液。放入Lumicycle光度测定仪记录细胞中时钟基因的长时生物钟。结果:1.3%地氟醚处理后无小鼠达到翻正反射消失;4%、6%、7%、9%地氟醚处理后达到翻正反射消失的小鼠比例分别为16.7%、50%、100%和100%,因此确定实验中使用地氟醚的作用浓度为7%。2.与对照组相比,7%地氟醚麻醉C57小鼠2小时后,下丘脑组织时钟基因Per2的表达量显著降低(P0.05),其余五个时钟基因的表达量无显著性改变(P0.05);肾脏组织中时钟基因Per1的表达量显著升高,时钟基因Bmal1、Dbp的表达量显著降低(P0.05),另外三个时钟基因的表达量无显著性改变(P0.05);肝脏组织时钟基因Per1的表达量显著升高(P0.05),其余五个时钟基因的表达量无显著性改变(P0.05)。3.所得条带在440bp处表示为Per1~(-/-)小鼠,条带在320bp处表示为Per2~(-/-)小鼠,在440bp和320bp处均有条带表示为Per1~(-/-)/Per2~(-/-)小鼠,在416bp处有条带表示为Per1~(+/+)小鼠,在388bp处有条带表示为Per2~(+/+)小鼠,在416bp和388bp处均有条带表示为Per1~(+/+)/Per2~(+/+)小鼠。将基因组在440bp和320bp处均有条带的小鼠视为Per1~(-/-)/Per2~(-/-)纯合子。4.与对照组相比,7%地氟醚麻醉Per1~(-/-)/Per2~(-/-)小鼠2小时后,下丘脑组织时钟基因Bmal1、Clock、Dbp的表达量显著降低(P0.05);肝脏组织和肾脏组织时钟基因Cry1、Clock的表达量显著降低(P0.05),Bmal1、Dbp的表达量无显著性改变(P0.05)。5.相比于对照组,1.5μM丙泊酚导致细胞时钟基因Per2的振幅增加,但丙泊酚处理浓度增加后,时钟基因Per2的振幅降低,且降低程度具有浓度依赖性,而对照组和加药组U2OS细胞时钟基因Per2的节律周期均在22-23小时之间波动,无显著性改变(P0.05)。结论:1.气体麻醉药地氟醚显著影响小鼠中枢及外周组织的生物钟,但不直接通过Per基因产生作用;2.静脉麻醉药物丙泊酚降低细胞中时钟基因Per2的振幅。
【图文】：

陆军军医大学硕士学位论文 结 果地氟醚麻醉后小鼠翻正反射是否消失用于判断小鼠是否达到全身麻醉水平。结3%地氟醚处理，无小鼠达到翻正反射消失状态；4%地氟醚处理，达到翻正反小鼠比例为 16.7%；6%地氟醚处理，，达到翻正反射消失的小鼠比例为 50%；处理，达到翻正反射消失的小鼠比例为 100%；9%地氟醚处理，达到翻正反射鼠比例为 100%（图 1）。即 7%及以上浓度地氟醚可完全达到小鼠的全身麻醉水%地氟醚是达到小鼠麻醉状态的临界作用浓度。

陆军军医大学硕士学位论文基因 Per1、Per2、Dbp、Bmal1、Clock、Cry1 的表达量。结果显示，相比对照组，7%地氟醚组 C57BL/6J 小鼠肾脏组织时钟基因 Per1 的表达量显著性升高，而时钟基因Bmal1、Dbp 的表达量均显著性降低（P＜0.05，图 3A)。肝脏组织时钟基因 Per1 的表达量显著性升高（P＜0.01，图 3B)。
【学位授予单位】：中国人民解放军陆军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R614

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本文编号：2635512