右美托咪定对七氟烷引起大鼠海马神经细胞凋亡的影响
发布时间：2020-11-03 03:32
目的:初步探究拟在吸入七氟烷基础上探讨右美托咪定对七氟烷引起大鼠海马神经细胞凋亡的影响,为降低临床麻醉中神经细胞损伤产生提供更多理论依据。方法:健康雄性SD大鼠随机分为四组:假手术组(A组)、七氟烷组(S组)、右美托咪定+七氟烷组(D+S组)、育亨宾+右美托咪定+七氟烷组(Y+D+S组)。各组做好标记,Y+D+S组腹腔注射育亨宾2.5mg/kg,右美托咪定20ug/kg,吸入1.5%七氟烷1 h/d。D+S组右美托咪定20ug/kg,吸入1.5%七氟烷1h/d。S组吸入1.5%七氟烷1h/d。A组动物实验中心常温饲养。14 d后采用Y迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,应用HE染色技术和尼氏染色技术观察大鼠海马神经细胞形态学改变,采用免疫组化技术、Western blot技术测定大鼠海马Caspase-3、Bax和Bcl-2的表达量。结果:Y迷宫检测发现,S组和Y+D+S组SD大鼠空间学习、记忆能力明显下降。而D+S组SD大鼠空间学习、记忆能力也下降,但比S组和Y+D+S组SD大鼠下降程度小。免疫组化和Western blot检测发现A组和D+S组Caspase-3、Bax的表达比S组和Y+D+S组表达少,而Bcl-2比S组和Y+D+S组表达多。D+S组海马神经细胞HE染色细胞皱缩少,形态多数完整,海马神经细胞尼氏染色尼氏小体较多,有层次感。A组几乎未见异常。S组和Y+D+S组海马神经细胞HE染色松散,形态不完整。尼氏染色尼氏小体明显减少,层次感差。结论:1.SD大鼠间断吸入七氟烷后空间学习、记忆能力明显下降,证明吸入七氟烷会对学习、记忆产生影响。2.右美托咪定对七氟烷引起SD大鼠海马神经细胞产生保护作用,其作用机制可能通过α_2-肾上腺素受体实现。
【学位单位】：大理大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R614
【部分图文】：
1. 电泳1) 将玻璃板放入电泳槽中，小玻璃板面向内侧，大玻璃板面向外侧卡紧。电泳槽放入装满碎冰的盆子里。2) 倒入足够电极缓冲液，注意电泳液要没过内侧小玻璃板高度，准备蛋白加样3) 将预先变性的样品蛋白按之前算好的体积缓慢加入对应加样孔里，避免产生气泡，其中一道加样孔加入 5 ul 的 Marker。如果有加样孔有剩余，要用 5 uLoading Buffer 填满（保证每个孔都有“样品”）。4) 接好正负极，电泳槽盖子盖好，打开电源开始电泳，开始稳压在 60 V，待 Marke跑到分离胶后出现明显分层后将电压调到 120 V，继续电泳，当样品中的溴酚蓝指示剂达到下沿边缘时，可以停止电泳。3.转膜1) 电泳完成后取出玻璃板，先用凝胶铲缓慢把玻璃板撬开，倒一点双蒸水保持凝胶湿润，撬开后可以先切去浓缩胶，然后按着 Marker 给出的分子量标准分别切取有效部分目的凝胶，准确量好每个目的凝胶长和宽，将凝胶放入提前配好的转膜液中。（Caspase-3、Bax、Bcl-2 蛋白分子量见图 4）
图 5 SD 大鼠 Y 迷宫检测 10 次正确需要的电击次数比较.5 SD rat Y maze test 10 times need to compare the number of electric shocks.aPpared with group A;bP>0.05 compared with group S;cP<0.05 compared with groupsham surgery group；S，sevoflurane group；D+S，dexmedetomidine+ sevoflurane gD+S，Yohimbe+ dexmedetomidine+ sevoflurane group.组 SD 大鼠海马区 HE 染色结果各组大鼠海马组织神经细胞 HE 染色结果（见图 6）：A 组：与其他三组相比较，HE 染色显示 A 组海马神经细胞结构完整，形排列整齐紧密，细胞浆红染，细胞核蓝染且清晰，未见凋亡细胞，分布均S 组和 Y+D+S 组：与 A 组和 D+S 组相比较，HE 染色显示海马神经细胞异常，细胞轮廓模糊，形态不规则，排列紊乱松散，细胞结构不完整，清晰，可见大量细胞凋亡，细胞体积缩小，细胞核固缩且深染，神经细失。D+S 组：与 S 组和 Y+D+S 组相比较，HE 染色显示海马神经细胞结构相
图 6.1 A 组 SD 大鼠海马神经细胞 HE染色结果 200×Fig.6.1 results of HE staining ofhippocampal neurons in group A SDrats 200×图 6.2 S 组 SD 大鼠海马神经细胞 HE染色结果 200×Fig.6.2 results of HE staining ofhippocampal neurons in group S SDrats 200×图6.3 D+S组SD大鼠海马神经细胞HE图 6.4 Y+D+S 组 SD 大鼠海马神经细胞
【参考文献】
本文编号：2868030
【学位单位】：大理大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R614
【部分图文】：
1. 电泳1) 将玻璃板放入电泳槽中，小玻璃板面向内侧，大玻璃板面向外侧卡紧。电泳槽放入装满碎冰的盆子里。2) 倒入足够电极缓冲液，注意电泳液要没过内侧小玻璃板高度，准备蛋白加样3) 将预先变性的样品蛋白按之前算好的体积缓慢加入对应加样孔里，避免产生气泡，其中一道加样孔加入 5 ul 的 Marker。如果有加样孔有剩余，要用 5 uLoading Buffer 填满（保证每个孔都有“样品”）。4) 接好正负极，电泳槽盖子盖好，打开电源开始电泳，开始稳压在 60 V，待 Marke跑到分离胶后出现明显分层后将电压调到 120 V，继续电泳，当样品中的溴酚蓝指示剂达到下沿边缘时，可以停止电泳。3.转膜1) 电泳完成后取出玻璃板，先用凝胶铲缓慢把玻璃板撬开，倒一点双蒸水保持凝胶湿润，撬开后可以先切去浓缩胶，然后按着 Marker 给出的分子量标准分别切取有效部分目的凝胶，准确量好每个目的凝胶长和宽，将凝胶放入提前配好的转膜液中。（Caspase-3、Bax、Bcl-2 蛋白分子量见图 4）
图 5 SD 大鼠 Y 迷宫检测 10 次正确需要的电击次数比较.5 SD rat Y maze test 10 times need to compare the number of electric shocks.aPpared with group A;bP>0.05 compared with group S;cP<0.05 compared with groupsham surgery group；S，sevoflurane group；D+S，dexmedetomidine+ sevoflurane gD+S，Yohimbe+ dexmedetomidine+ sevoflurane group.组 SD 大鼠海马区 HE 染色结果各组大鼠海马组织神经细胞 HE 染色结果（见图 6）：A 组：与其他三组相比较，HE 染色显示 A 组海马神经细胞结构完整，形排列整齐紧密，细胞浆红染，细胞核蓝染且清晰，未见凋亡细胞，分布均S 组和 Y+D+S 组：与 A 组和 D+S 组相比较，HE 染色显示海马神经细胞异常，细胞轮廓模糊，形态不规则，排列紊乱松散，细胞结构不完整，清晰，可见大量细胞凋亡，细胞体积缩小，细胞核固缩且深染，神经细失。D+S 组：与 S 组和 Y+D+S 组相比较，HE 染色显示海马神经细胞结构相
图 6.1 A 组 SD 大鼠海马神经细胞 HE染色结果 200×Fig.6.1 results of HE staining ofhippocampal neurons in group A SDrats 200×图 6.2 S 组 SD 大鼠海马神经细胞 HE染色结果 200×Fig.6.2 results of HE staining ofhippocampal neurons in group S SDrats 200×图6.3 D+S组SD大鼠海马神经细胞HE图 6.4 Y+D+S 组 SD 大鼠海马神经细胞
【参考文献】
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1 李建立;刘玉茹;张煜东;吴红海;侯艳宁;;右美托咪定诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响[J];医学研究生学报;2015年12期
2 孔林林;张军;乔枫;祁金顺;;基于小鼠Morris水迷宫和Y迷宫联合试验的多任务行为学测试研究[J];神经解剖学杂志;2013年04期
3 林琳;兰爱平;张莉莉;周舸;华潇潇;刘明姬;冯鉴强;莫利求;;右美托咪定对抗化学性低氧引起神经细胞的损伤及其机制[J];广东医学;2012年08期
本文编号：2868030
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