丙泊酚对不同分化程度人结肠癌细胞体外增殖、迁移及Wnt信号通路的影响

发布时间：2020-11-04 05:36

　　 丙泊酚(Propofol)是目前最常用的静脉麻醉药物。近年来,丙泊酚与肿瘤之间的关系成为研究的热点。现有研究发现,丙泊酚影响肿瘤细胞生长、增殖、迁移、侵袭、转移等生物学行为。在消化系统的恶性肿瘤之中结肠癌(colorectal cancer,CRC)最为常见。统计数据显示,2015年我国CRC的新发病率和死亡率均位居第五位。结肠癌的发生、发展是一个连续复杂过程,病因及发病机制至今尚未完全明了。近年来的研究发现,Wnt/β-catenin信号通路的异常激活与人结肠癌的生长、增殖、迁移、侵袭等密切相关。目前仅报道了丙泊酚可抑制人结肠癌LoVo细胞的侵袭,与ERK1/2依赖的MMPs表达下调有关。而关于丙泊酚对结肠癌细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响尚未见报道。此外,也尚未见丙泊酚对不同分化程度人结肠癌细胞生物学功能(生长增殖、迁移)影响的比较研究。因此,本研究通过选取2株分化程度不同的人结肠癌细胞株Caco-2(高分化)和LoVo(低分化),CCK-8法检测丙泊酚对Caco-2和LoVo细胞生长增殖的影响,transwell迁移实验检测丙泊酚对Caco-2和LoVo细胞迁移的影响,比较不同分化程度结肠癌细胞对丙泊酚的敏感性是否会有区别。然后Real-time PCR检测丙泊酚对Caco-2和LoVo细胞Wnt/β-catenin信号通路关键分子Wntl、β-catenin基因mRNA表达的影响,Western blot检测丙泊酚对Caco-2和LoVo细胞Wntl、β-catenin蛋白表达的影响。CCK-8检测结果显示,6.25～100 μg/mL的丙泊酚能以时间和浓度依赖性的方式不同程度地抑制Caco-2和LoVo细胞的生长增殖,与低分化的LoVo细胞相比,高分化的Caco-2细胞对丙泊酚更敏感。Transwell实验结果表明,6.25～100μg/mL的丙泊酚也能以时间和浓度依赖性的方式对Caco-2和LoVo细胞的迁移产生一定的抑制作用,高分化的Caco-2细胞对丙泊酚更敏感。Real-time PCR结果发现,6.25～100 μg/mL的丙泊酚处理后,Caco-2和LoVo细胞中Wntl和β-catenin基因的mRNA表达水平均有不同程度地降低,具有浓度依赖性,丙泊酚对高分化的Caco-2细胞Wntl和β-catenin基因mRNA表达的影响更明显。Western blot实验结果也显示,6.25～100 μg/mL的丙泊酚能不同程度地降低Caco-2和LoVo细胞中Wntl和β-catenin蛋白的表达水平,也具有浓度依赖性,丙泊酚对高分化的Caco-2细胞Wntl和β-catenin蛋白表达的影响更明显。通过上述研究,我们得出本研究的结论:丙泊酚通过降低Wnt/β-catenin信号通路活性抑制人结肠癌细胞Caco-2和LoVo的生长增殖以及迁移。高分化的人结肠癌细胞Caco-2对丙泊酚更敏感。
【学位单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.35
【部分图文】：

１丙泊酚对不同分化程度人结肠癌细胞存活率的影响??ＣＣＫ－８检测丙泊酚对高分化人结肠癌Ｃａｃｏ－２细胞生长增殖的影响。实验结??果显示（图１Ａ），丙泊酚对Ｃａｃｏ－２细胞有生长抑制作用，随着丙泊酚浓度的增??加（６．２５？１００?ｐｇ／ｍＬ）?，?Ｃａｃｏ－２细胞生长受到的抑制作用愈明显。而且，随着??作用时间延长（从２４ｈ延长至４８ｈ），丙泊酚能进一步抑制Ｃａｃｏ－２细胞的生长??（图１Ａ）。表明丙泊酚抑制Ｃａｃｏ－２细胞的生长增殖具有明显的时间和浓度依赖??性。例如，丙泊酚作用２４ｈ时，２５?ｐｇ／ｍＬ和１００吨／ｍＬ的丙泊酚对Ｃａｃｏ－２细胞??的生长抑制率分别约为１５％和６９％；当作用时间延长至４８ｈ时，２５吨／ｍＬ和１００??ｐｇ／ｍＬ的丙泊酚对Ｃａｃｏ－２细胞的生长抑制率分别约为２２％和９０％（图１Ａ，表１?）。??各组Ｃａｃｏ－２细胞生长增殖情况以及相关统计分析详见表１。??Ａ：??１２０?－Ｉ??芎?１００?？?Ｔ??卜．??＾?６０－??—］?＼＼??会?一？—?２４ｈ?１?＼??１?４０－?一?■?＼＼??０，ＶＶＶＶＶ、??１５??

Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室内的Ｃａｃｏ－２和ＬｏＶｏ细胞分别经不同浓度的丙泊酿（０、６．２５、??２５、１００?ｇｇ／ｍＬ）作用４８ｈ后，迁移至基底膜下面一侧膜上的细胞经结晶紫染色??后的显微镜照片如图２所示。经ＤＭＳＯ溶解后读取〇〇４５０？：？值，数据作图分析可??以看出，相同浓度的丙泊酚对Ｃａｃｏ－２细胞的迁移抑制效应强于对ＬｏＶｏ细胞的迁??移抑制作用（图３）。??经统计分析（表３），Ｃａｃｏ－２细胞中，丙泊酚各浓度组（６．２５?（ｉｇ／ｍＬ、２５?｜ｉｇ／ｍＬ、??１７??

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【参考文献】

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1 张健;丙泊酚对肝细胞肝癌生长和转移的抑制作用及机制研究[D];浙江大学;2015年

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本文编号：2869696