烟酸对糖尿病视网膜病变保护作用及其机制的研究

发布时间：2017-04-17 04:02

  本文关键词：烟酸对糖尿病视网膜病变保护作用及其机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察烟酸对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病视网膜病变是否具有保护作用,并探讨相关的作用机制。方法:健康雄性6-8周C57BL/6J小鼠48只,随机分为正常对照组、糖尿病造模组、烟酸干预组,每组16只。糖尿病造模组和烟酸干预组采用连续5天腹腔注射50mg/kg链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病小鼠模型,烟酸干预组在糖尿病模型4周月后喂食含烟酸(0.5%,w/w)4周,其余两组喂食不含烟酸的同样食物。烟酸干预4周后,将小鼠深度麻醉,行心脏灌注去除血管中血液成分,摘取小鼠眼球,去除眼前节,然后进行固定、蔗糖梯度脱水、包埋、冰冻切片,通过免疫荧光染色检测各组视网膜中NADPH氧化酶4(Nox4)、NADPH氧化酶2(Nox2)、3-硝基酪氨酸(3-NT)和细胞间粘附分子(ICAM-1)的表达情况;取视网膜组织通过蛋白免疫印迹技术检测NADPH氧化酶4(Nox4)和NADPH氧化酶2(Nox2)蛋白含量表达情况的变化;蛋白免疫印迹技术检测各组小鼠视网膜渗漏的白蛋白含量及各组小鼠视网膜紧密连接蛋白ZO-1和Occludin含量;荧光标记的Concanavalin A灌注染色检测烟酸对糖尿病视网膜血管白细胞粘附的影响;视网膜铺片claudin-5免疫荧光染色检测各组小鼠视网膜中血管紧密连接破坏情况。结果:免疫荧光染色显示糖尿病组NADPH氧化酶4(Nox4)、3-NT和ICAM-1表达明显升高,而烟酸处理组Nox4、3-NT和ICAM-1表达较糖尿病组下降;从蛋白水平上看,糖尿病组Nox4和Nox2的含量较正常对照组明显升高,烟酸作用后可逆转这种升高,使Nox4和Nox2的表达下降;western blot结果显示糖尿病情况下视网膜中白蛋白含量较正常对照组显著升高,而烟酸干预组视网膜中白蛋白含量较糖尿病组明显降低;western blot结果显示糖尿病情况下视网膜紧密连接蛋白ZO-1和Occludin含量较正常对照组显著减少,而糖尿病后烟酸干预可使上述蛋白含量较糖尿病组明显升高;白细胞粘附试验显示糖尿病组小鼠视网膜血管上粘附的白细胞数量较正常对照组小鼠升高,而糖尿病烟酸干预组小鼠视网膜血管上粘附的白细胞数量较糖尿病组有所下降;视网膜铺片claudin-5免疫荧光染色示正常小鼠视网膜内有较多的claudin-5表达,糖尿病状态下视网膜claudin-5表达减少,而烟酸干预后视网膜claudin-5表达较糖尿病小鼠上升。结论:本研究表明烟酸对糖尿病视网膜病变具有保护作用,其机制可能通过抗炎症及抗氧化机制来实现。
【关键词】：糖尿病视网膜病变 烟酸 炎症反应 氧化应激
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R774.1
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 前言11-14
• 第2章 材料与方法14-26
• 2.1 材料14-19
• 2.1.1 动物实验14
• 2.1.2 抗体14
• 2.1.3 蛋白免疫印迹14-15
• 2.1.4 免疫荧光15
• 2.1.5 白细胞黏附实验15
• 2.1.6 视网膜铺片免疫荧光染色15-16
• 2.1.7 溶液配制16-19
• 2.1.8 实验仪器19
• 2.2 实验方法19-25
• 2.2.1 小鼠糖尿病模型的建立19-20
• 2.2.2 烟酸食物制备20
• 2.2.3 Western blot检测20-23
• 2.2.4 免疫荧光法23-24
• 2.2.5 视网膜血管白细胞粘附的定量检测24
• 2.2.6 视网膜血管claudin-5 免疫荧光染色24-25
• 2.3 统计学分析25-26
• 第3章 结果26-36
• 3.1 各组小鼠血糖及体重比较26-27
• 3.2 烟酸抑制STZ诱导的糖尿病小鼠视网膜中Nox4和Nox2的表达27-29
• 3.3 烟酸抑制STZ诱导的糖尿病小鼠视网膜中 3-硝基酪氨酸（3-NT）的表达29-30
• 3.4 烟酸抑制STZ诱导的糖尿病小鼠视网膜中ICAM-1 的表达30-31
• 3.5 烟酸抑制STZ诱导的糖尿病小鼠视网膜血管白细胞粘附31-32
• 3.6 烟酸减轻STZ诱导的糖尿病小鼠视网膜血管渗漏32-33
• 3.7 烟酸抑制STZ诱导的糖尿病小鼠视网膜血管紧密连接的破坏33-36
• 3.7.1 烟酸抑制STZ诱导的糖尿病小鼠视网膜血管Claudin-5 表达缺失33-34
• 3.7.2 烟酸抑制STZ诱导的糖尿病小鼠视网膜血管ZO-1 表达下降34-35
• 3.7.3 烟酸抑制STZ诱导的糖尿病小鼠视网膜血管Occludin表达下降35-36
• 第4章 讨论36-42
• 第5章 结论42-43
• 致谢43-44
• 参考文献44-50
• 综述50-57
• 参考文献54-57

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘鸫,荣翱;视网膜细胞凋亡相关疾病及其治疗进展[J];同济大学学报(医学版);2004年05期

2 ;美研究新成就:借仿生视网膜可复明[J];中国眼镜科技杂志;2004年07期

3 孙晓东,张皙,许迅,余彰,陈荣家;实验性视网膜脱离时神经生长因子对视网膜的保护作用[J];中华眼科杂志;2003年05期

4 陈少军,阴正勤,高钰琪;碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子在视网膜激光损伤修复中的作用[J];中华眼科杂志;2003年11期

5 吴文灿;形觉剥夺性近视眼视网膜调控机制研究进展[J];中国实用眼科杂志;2003年04期

6 孙晓东,张皙,许迅,陆红芬,陈荣家;实验性视网膜脱离复位后的视网膜细胞凋亡[J];眼科新进展;2005年04期

7 高永峰,郭希让;视网膜芯片的研究和应用进展[J];国外医学.眼科学分册;2005年02期

8 孙晓东;张皙;许迅;余彰;陈荣家;路长林;;实验性视网膜脱离时神经生长因子对视网膜细胞凋亡的干预作用[J];中华眼底病杂志;2006年05期

9 吴继红;张圣海;刘焰;陈霞芳;徐萍;吴小兵;黄倩;;1型及2型腺相关病毒对视网膜细胞转导效率的比较研究[J];中华医学杂志;2006年40期

10 孙曙光;李才锐;周智广;姜德咏;;早期非肥胖性糖尿病小鼠视网膜细胞凋亡[J];国际眼科杂志;2007年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陈丽娟;;经瞳孔热疗后兔眼视网膜细胞凋亡的观察[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

2 李涛;张虹;李贵刚;胡维琨;;地塞米松对大鼠缺血再灌注损伤视网膜中葡萄糖转运蛋白—1表达的影响[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

3 张丽琼;滕岩;崔浩;李明生;栾丽娟;刘学琴;;丹参对兔视网膜光损伤防治作用的实验研究[A];中华中医药学会第五次眼科学术交流会论文汇编[C];2006年

4 杨霞;彭清华;张波涛;叶群如;江运长;;补阳还五汤加减干预激光损伤兔视网膜后视网膜缝隙连接蛋白Cx43表达的研究[A];中华中医药学会第七次眼科学术交流会论文汇编[C];2008年

5 卢艳;;增龄大鼠视网膜老化过程中各层细胞数目变化[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

6 李颖;胡运韬;马汀;张陶然;马志中;;视网膜石蜡切片Rhodopsin和CRALBP不同抗原修复方法的比较观察[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

7 田田;朱小华;;玻璃体积血对兔视网膜的影响及维生素E保护作用的实验研究[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

8 陈少强;陈瑞华;黄焱;张更;;糖尿病早期大鼠视网膜醛糖还原酶与视细胞超微结构改变的相关性及氨基胍的保护作用[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

9 钟良玉;卢辉;徐俊丽;张雨;;光学相干断层扫描对中药治疗年龄相关性黄斑变性疗效评价的优势研究[A];庆祝浙江省中西医结合学会成立三十周年论文集粹2011[C];2011年

10 刘学政;萧鸿;;凋亡相关基因Bc12、Bax在早期糖尿病大鼠视网膜的表达[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 本报记者 李婵;移植流产儿视网膜引发伦理争议[N];北京科技报;2004年

2 实习生 贾海;细胞可重造受损视网膜[N];科技日报;2007年

3 阴慧娟;仿生猫眼：失明者的希望[N];医药经济报;2007年

4 钱铮;人胚胎干细胞可高效培养视网膜细胞[N];医药经济报;2008年

5 记者 毛磊;美发明仿生视网膜[N];新华每日电讯;2003年

6 文欣;仿生视网膜：让盲者看到光明[N];医药经济报;2003年

7 ;移植流产胎儿视网膜细胞手术引发争议[N];医药经济报;2004年

8 记者　 何屹;视网膜细胞移植有望使盲人重见天日[N];科技日报;2006年

9 陈丹;眼睛“干细胞”被成功唤醒[N];科技日报;2008年

10 通讯员 石明山邋记者 张兆军;视网膜细胞可清晰显现[N];科技日报;2008年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 刘磊磊;Sigma受体1在大鼠视网膜中的表达及与神经节细胞AMPA受体的相互作用[D];复旦大学;2014年

2 杨子建;腺苷对实验性青光眼视网膜Müller细胞钾离子通道调控的研究[D];上海交通大学;2014年

3 费霏;缺血缺氧性视神经视网膜损伤的分子机制研究[D];第四军医大学;2015年

4 曲巍;NgR/NR2B信号通路对糖尿病视网膜RGC的影响[D];广西医科大学;2015年

5 石珂;靶向抑制GLUT1对糖尿病视网膜病变的作用研究[D];南昌大学;2016年

6 刘忠虎;花背蟾蜍视网膜形态发育及视网膜生理活动对角膜诱导影响研究[D];兰州大学;2011年

7 郭瑶;缺血性视神经病变视网膜细胞凋亡信号转导初步探讨[D];中国医科大学;2007年

8 邵玉红;低水平铅暴露对发育期大鼠视网膜、视神经的影响[D];浙江大学;2007年

9 曾洁萍;灯盏细辛提取物对高压状态下视网膜保护作用的基因调控研究[D];成都中医药大学;2008年

10 田春雨;视网膜色素变性大鼠Müller细胞逆分化为视网膜前体细胞的研究[D];第三军医大学;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 郝玲玲;基于Parylene-C柔性视网膜金微电极的电化学特性及植入可行性研究[D];北京协和医学院;2015年

2 李晶艳;Nrf2、HO-1在糖尿病大鼠视网膜中的表达及tBHQ干预研究[D];四川医科大学;2015年

3 陈果;烟酸对糖尿病视网膜病变保护作用及其机制的研究[D];南昌大学医学院;2015年

4 刘t熡，

本文编号：312340