清肝祛湿颗粒对SHR肾素-血管紧张素-醛固酮及主动脉壁profilin-1、cofilin-1蛋白表达调控的研究

发布时间：2017-05-25 12:17

  本文关键词：清肝祛湿颗粒对SHR肾素-血管紧张素-醛固酮及主动脉壁profilin-1、cofilin-1蛋白表达调控的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：对服用中药经验方清肝祛湿颗粒的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat, SHR)进行血压监测,以明确其降压效果。运用酶联免疫吸附实验法(ELISA)测定大鼠血清醛固酮(ALD)、肾素(PRA)、血管紧张素Ⅰ (AngⅠ血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)水平,探讨清肝祛湿颗粒治疗高血压的降压机制：通过抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统(Renin-angiotensin-aldosterone, RAAS)控制血压的可能机制,为临床应用清肝祛湿颗粒治疗高血压提供实验依据。并通过检测大鼠胸主动脉骨架蛋白前纤维蛋白1 (profilin-1)和切丝蛋白1(cofilin-1)明确血管重构(vascular remodeling, VR)在高血压疾病中的发生发展,及清肝祛湿颗粒的治疗对其产生的影响。方法：选取13周龄的SHR 50只,雌雄各半；13周龄正常大鼠(Wistar Kyoto rat, WKY)10只,雌雄各半,均购自北京维通利华试验动物技术有限公司,由广安门医院Ⅱ级动物房分笼饲养,首先测定每只大鼠的基础血压。将SHR大鼠随机分为卡托普利组(Cap组)、清肝祛湿颗粒大剂量组(中药大组)、清肝祛湿颗粒中剂量组(中药中组)、清肝祛湿颗粒小剂量组(中药小组)、模型对照组(Model组),健康WKY作为空白对照组(Control组),每组均雌雄个半。Cap组：用纯净水按含生药量1.5mg/ml配制成的混悬液,以1ml/100g给药灌胃,每天灌胃1次,连续灌胃四周；中药大组：用纯净水按含生药量0.36g/ml配制成的混悬液,以lml/100g给药灌胃,每天灌胃1次,连续灌胃四周；中药中组：用纯净水按含生药量0.12g/ml配制成的混悬液,以1m1/100g给药灌胃,每天灌胃1次,连续灌胃四周；中药小组：用纯净水按含生药量0.04g/ml配制成的混悬液,以1m1/100g给药灌胃,每天灌胃1次,连续灌胃四周；Model组和Control组：均予纯净水1m1/100g灌胃,每天灌胃1次,连续灌胃四周。灌胃四周期间每隔6天测量一次所有清醒安静状态下大鼠的尾动脉血压,每周每只至少连续测量3次,取其均值作为每周大鼠血压数据记录。于第四周血压测量结束后,所有大鼠在麻醉状态进行颈总动脉插管测量收缩压及舒张压水平。保存并记录数据后,采集腹主动脉血置于血清管内,室温静置1h后,在4℃下以3000r/min离心10min后,取上清液的血清于-80℃超低温冰箱冷冻保存。按照标准步骤,通过ELASA方法测量血清中血清醛固酮(ALD)、肾素(PRA)、血管紧张素Ⅰ (AngⅠ)血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)水平。取血后快速摘取大鼠胸主动脉段,置于液氮中保存,运用Western blot技术检测profilin-1及cofilin-1水平后进行比较。上述所得数据均应用统计学软件SPSS20.0进行分析处理。结果：1.清肝祛湿颗粒对SHR血压的影响：(1)每周尾动脉血压水平比较：Control与组比较,Model组大鼠4周的血压水平均明显增高,有极显著的差异性(P0.01)。与Model组比较,Cap组、中药中组大鼠自第一周的血压水平便有降低(P0.05),第四周的血压水平显著降低(P0.01)；中药大组、中药小组大鼠血压水平自第二周开始血压水平呈明显降低(P0.01)。与Cap组比较,中药中组大鼠4周的血压下降水平无明显差异；与Cap、中药中组比较,中药大、中药小组大鼠4周的血压下降水平有所不及,有明显差异(P0.05)。(2)颈动脉插管血压水平比较：与Control组比较,Model组大鼠收缩压及舒张压水平均明显增高,有极显著的差异性(P0.01)。与Model组比较,Cap组大鼠收缩压水平明显降低,有极显著的差异性(P0.01)；与Cap组比较,中药中组大鼠不仅收缩压水平明显降低,有极显著的差异性(P0.01),其舒张压水平也有降低,具有差异性(P0.01)。2.清肝祛湿颗粒对RAAS的影响：(1)肾素(PRA)：与Control组比较,Model组大鼠PRA水平明显增高,有极显著的差异性(P0.01)。与Model组比较,4组用药大鼠PRA水平均有明显降低,有极显著的差异性(P0.01)。与中药大组、中药小组比较,Cap组大鼠PRA下降水平有显著的差异性(P0.01),中药中组下降水平有所不及(P0.05)。(2)血管紧张素Ⅰ(Ang Ⅰ)：与Control组比较,Model组大鼠PRA水平明显增高,有极显著的差异性(P0.01)。与Model组比较,4组用药组大鼠AngⅠ水平均有明显降低,有极显著的差异性(P0.01)。与中药大组、中药小组比较,Cap组大鼠AngⅠ下降水平有显著的差异性(P0.01),中药中组下降水平有所不及(P0.05)。(3)血管紧张素Ⅱ (AngⅡ):与Control组比较,Model组大鼠PRA水平明显增高,有极显著的差异性(P0.01)。与Model组比较,Cap、中药中组大鼠AngⅡ水平明显降低,有极显著的差异性(P0.01)；与E组比较,中药大、中药小组大鼠AngⅡ水平有所降低(P0.05)。与Cap组比较,中药中组大鼠ALD水平无明显差异；与中药大、中药小组比较,Cap组大鼠AngⅡ下降水平有显著的差异性(P0.01),中药中组下降水平有所不及(P0.05)。(4)醛固酮(ALD)：与Control组比较,Model组大鼠PRA水平明显增高,有极显著的差异性(P0.01)。与Model组比较,4组用药组大鼠ALD水平均有明显降低,有极显著的差异性(P0.01)。与中药大组、中药小组比较,Cap组、中药中组大鼠ALD下降水平均有差异性(P0.05)。3.清肝祛湿颗粒对血管重构的影响：(1)前纤维蛋白1 (profilin-1):与Control组比较,Model组profilin-1的表达水平明显增高,有极显著的差异性(P0.01)。与Model组比较,4组用药组大鼠profilin-1的表达水平均有降低(P0.01)。与Cap、中药中组比较,中药大组、中药小组大鼠profilin-1的下降水平有所不及,有明显差异(P0.01)。(2)切丝蛋白1 (cofilin-1):与Control组比较,Model组大鼠cofilin-1表达水平明显增高,有极显著的差异性(P0.01)。与Model组比较,4组用药组大鼠cofilin-1的表达水平均有降低(P0.01)。与Cap、中药中组比较,中药大组、中药小组大鼠cofilin-1的下降水平有所不及,有明显差异(P0.01)。结论：1.清肝祛湿颗粒可降低SHR血压。2.清肝祛湿颗粒可降低SHR血清PRA、AngⅠ、AngⅡ、ALD水平,抑制RAAS的过表达。3.清肝祛湿颗粒可下调SHR主动脉壁profilin-1和cofifin-1蛋白表达,对高血压状态下的血管重构起到保护作用。
【关键词】：前纤维蛋白1 切丝蛋白1 清肝祛湿颗粒 肾素-血管紧张素-醛固酮系统 中医药治疗 自发性高血压大鼠
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R259
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-9
• 符号说明9-10
• 第一部分 文献综述10-30
• 综述一 中医从湿论治高血压的研究进展10-16
• 综述二 高血压血管重构中profilin-1和cofilin-1作用机制研究进展16-23
• 参考文献23-30
• 前言30-31
• 第二部分 实验研究31-47
• 实验一 清肝祛湿颗粒对SHR血压水平的影响31-37
• 材料与方法31-34
• 结果34-37
• 实验二 清肝祛湿颗粒对SHR血清ALD、PRA、Ang Ⅰ、Ang Ⅱ水平的影响37-42
• 材料与方法37-40
• 结果40-42
• 实验三 清肝祛湿颗粒对SHR主动脉壁profilin-1和cofilin-1蛋白表达的影响42-47
• 材料与方法42-45
• 结果45-47
• 讨论47-55
• 清肝祛湿颗粒对SHR血压水平的影响47-48
• 清肝祛湿颗粒对SHR RAAS的影响48-52
• 清肝祛湿颗粒对SHR主动脉壁profilin-1和cofilin-1蛋白表达的影响52-54
• 小结54-55
• 结语55-56
• 参考文献56-59
• 致谢59-60
• 主要研究成果60-61
• 个人简历61

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