犬超数排卵及手术法取卵的研究

发布时间：2017-08-17 13:05

  本文关键词：犬超数排卵及手术法取卵的研究

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【摘要】：本实验的主要内容分为犬的超数排卵技术、通过外科手术法获得成熟卵母细胞以及实验室镜检排卵情况三部分。犬的超数排卵技术是在外源性激素PMSG与hCG的联合应用下进行的,选用5只健康未发情母犬,体重约为5kg,实验第1天即给母犬注射PMSG,1-8天连续每天肌肉注射200 IU PMSG,隔3天即第11天肌肉注射2 000 IU hCG,隔10天即在第21天通过手术法进行取卵。手术法取卵是以经超数排卵后的母犬为基础,采用舒泰50进行麻醉,于脐后沿腹正中线做切口,切开皮肤和皮下组织,暴露腹腔,找到子宫、卵巢以及输卵管一并摘除,摘除后一并放入保温瓶中带回实验室。实验室镜检排卵情况是先以生理盐水清洗子宫、卵巢以及输卵管,剪掉多余组织,从宫管结合部用1mL的针头注入冲卵液(10mL冲卵液反复冲洗),另一端用平皿接收流出的液体,完成卵母细胞的收集。使用透明质酸酶机械地剥离卵丘细胞从而获得裸卵,排出第一级体的细胞即为成熟卵母细胞。染色后可以更直观清晰的看见卵母细胞中的极体。实验成功获得成熟卵母细胞,卵母细胞的平均成熟率为85.11%(40/47)。本实验旨在非发情季节1月份通过注射PMSG与hCG对母犬进行超数排卵,进而手术法取卵从而获得成熟卵母细胞。
【关键词】：犬 超数排卵 手术法取卵 成熟卵母细胞 舒泰50
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.292
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 前言11-20
• 1 犬业发展及需求11-12
• 2 同期发情技术12-14
• 2.1 同期发情原理及意义12-13
• 2.2 同期发情研究进展13-14
• 3 超数排卵技术14-17
• 3.1 超数排卵原理及意义14
• 3.2 超数排卵技术研究进展14-15
• 3.3 超数排卵常用激素15-17
• 3.3.1 孕马血清促性腺激素(PMSG)15-16
• 3.3.2 促卵泡素(FSH)16
• 3.3.3 促黄体素(LH)16
• 3.3.4 人绒毛膜促性腺激素(hCG)16-17
• 4 犬超数排卵17-18
• 5 取卵方法18-19
• 5.1 手术法取卵18-19
• 5.2 非手术法取卵19
• 6 研究目的及意义19-20
• PMSG与hCG联合应用对犬进行超数排卵20-21
• 1 材料20
• 1.1 实验动物20
• 1.2 实验药品20
• 2 方法20-21
• 2.1 实验动物分组20
• 2.2 生殖激素及注射剂量20
• 2.3 观察注射期间犬的变化20-21
• 外科手术法获得犬成熟卵母细胞21-22
• 1 材料21
• 1.1 实验动物21
• 1.2 实验器材及药品21
• 2 方法21-22
• 2.1 麻醉与消毒21
• 2.2 术式21
• 2.3 术后护理21-22
• 犬卵母细胞的采集及观察22-25
• 1 材料22
• 1.1 上实验摘除的子宫、卵巢以及输卵管22
• 1.2 主要试剂22
• 1.3 主要仪器22
• 2 主要溶液的配制22-23
• 2.1 生理盐水的配制22
• 2.2 TALP液的配制22-23
• 2.3 基础培养液NCSU-37的配制23
• 2.4 透明质酸酶的配制23
• 2.5 高渗液的配制23
• 3 卵母细胞的采集23
• 4 卵母细胞Hoechst 33258染色23-24
• 5 观察卵母细胞形态24
• 6 数据统计24-25
• 结果25-30
• 1 母犬发情情况25-26
• 2 手术法取卵26
• 3 卵细胞成熟情况26-30
• 讨论30-33
• 1 影响超数排卵的因素30-32
• 1.1 激素的选择、剂量以及给药方式30-31
• 1.2 进行超数排卵的时间31
• 1.3 营养31
• 1.4 冲卵方式31-32
• 2 卵母细胞的死亡32
• 3 麻醉药物的选择32
• 4 手术注意事项32-33
• 结论33-34
• 参考文献34-38
• 致谢38-39
• 作者简介39

【参考文献】

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本文编号：689130