人参皂苷Rg1调控凋亡对癫痫大鼠海马神经元的保护作用

发布时间：2017-08-30 07:27

  本文关键词：人参皂苷Rg1调控凋亡对癫痫大鼠海马神经元的保护作用

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【摘要】：[目的]癫痫(Epilepsy)是一种最常见的神经系统疾病之一,是由于神经元反复突然异常放电,导致短暂的中枢神经系统功能失调的慢性脑部疾病。目前癫痫的主要治疗方法以药物为主,常规及新型抗癫痫药物在临床应用中虽有一定的进展,但并不能完全控制所有的痫性发作,而且有1/3的癫痫患者经正规抗癫痫药物治疗后仍难以控制,产生耐药性,发展成为难治性癫痫。既往研究表明,频繁而持续的癫痫发作可导致大脑神经元凋亡,而细胞凋亡在癫痫后脑损伤及慢性癫痫的形成中起重要作用。近年来,对中草药的研究越来越多,人参皂苷 Rg1是从人参、三七等人参属植物中提取的主要活性成分之一,其具有抗凋亡、抗炎、抗氧化等神经保护作用。那么人参皂苷 Rg1 对癫痫是否有保护作用呢?基于以上假设,本研究拟通过建立氯化锂-匹罗卡品诱导大鼠癫痫模型,观察匹罗卡品诱导癫痫模型海马神经元凋亡情况；分析人参皂苷 Rg1 对海马神经元凋亡的影响；不同浓度人参皂苷 Rg1 的预处理,何种浓度效果较好；从而初步探讨人参皂苷 Rg1 对癫痫可能的神经保护机制。[方法]健康成年雄性SD大鼠100只(体重285±15g),随机分为5组：即空白对照组,匹罗卡品致痫组,50mg/kg人参皂苷 Rg1 治疗组、100mg/kg人参皂苷 Rg1 治疗组、200mg/kg人参苷 Rg1 治疗组,每组20只。G-Rg1 治疗组于造模前6 h分别对大鼠分别使用不同浓度的人参皂苷 Rg1 进行腹腔注射(introperitioneal. i.p),空白对照组和匹罗卡品致痫组同时给予相同剂量的生理盐水腹腔注射。6h后匹罗卡品致痫组及 G-Rg1 治疗组注射氯化锂(127mg/kg, i.p),18 h后给予硫酸阿托品(1 mg/kg, i.p)减轻匹罗卡品的胆碱能外周反应,30 min后予以匹罗卡品(30 mg/kg, i.p),空白对照组则给予与匹罗卡品等容量的生理盐水腹腔注射。观察大鼠行为学改变,根据Racine分级标准,达到Ⅲ级及以上发作可认为是癫痫发作,观察达Ⅲ级以上发作90 min后给予地西泮(10mg/kg)腹腔注射终止发作,后期给予精心护理以减少大鼠死亡。于点燃后72 h所有大鼠10%水合氯醛(350mg/kg)麻醉,一部分大鼠断头取脑,分离出海马,置于-80℃冰箱备用,采用Western Blot的方法检测大鼠海马中Bcl-2及Bax的表达,一部分大鼠使用4%多聚甲醛灌注取脑,蔗糖梯度脱水,包埋固定,冰冻切片机切成15μm厚度的大脑切片备用,采用免疫组化、免疫荧光的方法观察海马组织及神经元的形态,以及检测癫痫大鼠海马神经元中的Bcl-2及Bax的表达。[结果]空白对照组未出现癫痫发作及死亡,人参皂苷Rgl治疗组与匹罗卡品致痫组相比,大发作潜伏期时间延长,各组差异均有统计学意义(P0.05)。匹罗卡品诱导大鼠癫痫发作后,免疫组化及免疫荧光结果提示大鼠神经元尤其是海马神经元的胞浆内凋亡蛋白Bax免疫阳性反应增强,蛋白产物表达增多,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少。G-Rgl治疗组与匹罗卡品致痫组相比,促凋亡蛋白Bax表达减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达增加。Western Blot结果与免疫组化和免疫荧光结果相符,且在浓度为100mg/kg时抗凋亡作用明显。[结论]氯化锂联合匹罗卡品诱导大鼠癫痫发作,可引起凋亡因子Bcl-2及Bax的表达改变,Bcl-2表达降低,Bax表达上升,在海马区域出现神经元凋亡；人参皂苷Rg1可延长氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠的强直阵挛的发作潜伏期；以及降低致痫大鼠的死亡率,通过上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,下调促凋亡蛋白Bax的表达,减少氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马神经元的凋亡。本研究结果提示,人参皂苷Rgl对氯化锂联合匹罗卡品诱导的癫痫大鼠模型有明显的神经保护作用,其作用机制可能是通过上调癫痫大鼠海马组织中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,下调促凋亡蛋白Bax的表达来实现的。
【关键词】：人参皂苷Rg1 癫痫 凋亡 Bcl-2 Bax
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R742.1
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-16
• 材料与方法16-23
• 结果23-30
• 讨论30-34
• 结论34-35
• 参考文献35-42
• 综述42-49
• 参考文献46-49
• 攻读学位期间获得的学术成果49-50
• 致谢50

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本文编号：757999