补体C3a及C5a受体缺失延缓IgA肾病进展

发布时间：2017-04-22 19:19

  本文关键词：补体C3a及C5a受体缺失延缓IgA肾病进展，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的(1)通过动物实验验证补体C3a、C5a及其受体在Ig A肾病发病中的作用。(2)探究补体C3a、C5a及其受体在Ig A肾病发病中潜在作用机制。材料和方法(1)6-8周清洁级雌性Balb/c小鼠36只,阴性对照组、野生型组、C3a受体敲除组、C5a受体敲除组各9只,其中后三组统称为实验组。(2)采用有活性的仙台病毒滴鼻经鼻粘膜感染联合尾静脉注射建立小鼠Ig A肾病模型,测定24小时尿蛋白量、血清尿素氮、血清肌酐。(3)留取肾组织标本,通过直接免疫荧光法检测肾组织Ig A、C3沉积;采用PAS染色光镜下观察肾组织病理改变;采用RT-q PCR法检测肾组织中TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6、MCP-1 m RNA相对表达量;采用免疫组织化学的方法检测肾组织CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD68+单核巨噬细胞浸润及TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6、MCP-1等炎症因子因子沉积情况。结果(1)15周后实验组小鼠24小时尿蛋白量高于阴性对照组,且野生型组高于C3a受体敲除组及C5a受体敲除组;各组间小鼠血清尿素氮及血清肌酐差异无统计学意义。(2)实验组小鼠肾组织可见局灶节段性肾小球系膜细胞增生,系膜基质增多,部分小鼠肾组织可见肾小管上皮细胞肿胀,间质有单核巨噬细胞浸润等病理改变,且野生型组病变变较C3a受体敲除组及C5a受体敲除组明显,阴性对照组肾脏组织未见明显病理改变。(3)实验组小鼠肾组织TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6、MCP-1 m RNA相对表达量高于阴性对照组,同时野生型组高于C5a受体敲除组及C3a受体敲除组,另外IL-1β、IL-6、MCP-1的m RNA相对表达量C5a受体敲除组高于C3a受体敲除组。(4)肾组织免疫组织化学染色结果显示四组小鼠肾间质未见T细胞浸润现象,但可见散在单核巨噬细胞浸润,且实验组阳性率高于阴性对照组;四组小鼠肾组织中IL-6及IL-1β主要沉积于肾小球系膜区及肾小管上皮细胞胞浆,MCP-1及TNF-α主要沉积于肾小管上皮细胞胞浆,TGF-β则主要沉积于肾小球系膜细胞核及肾小管上皮细胞细胞核。相关分析发现肾组织单核巨噬细胞浸润及IL-6、IL-1β及MCP-1的表达量和蛋白尿呈正相关。结论(1)C3a及C5a受体缺失可减少Ig A肾病小鼠尿蛋白量,减轻Ig A肾病肾组织损伤,并且C3a受体缺失对肾脏的保护作用更加明显,提示C3a及C5a参与了Ig A肾病发病。(2)C3a及C5a受体缺失可减少肾组织单核巨噬细胞浸润,减少IL-1β、IL-6及MCP-1的分泌,提示C3a及C5a可能通过介导炎症反应参与Ig A肾病肾损伤。
【关键词】：IgA肾病 C3a C5a 受体
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 中英文缩写词对照表12-13
• 1 前言13-15
• 2 材料和方法15-27
• 2.1 研究对象和方法15
• 2.1.1 小鼠的选择15
• 2.1.2 血液和尿液标本的收集及测定15
• 2.2 实验耗材与试剂15-18
• 2.2.1 主要试剂及耗材15-17
• 2.2.2 主要实验仪器设备17-18
• 2.3 主要溶液的配制18
• 2.4 仙台病毒的扩增及血凝价测定18-19
• 2.4.1 仙台病毒扩增步骤18-19
• 2.4.2 仙台病毒血凝价测定步骤19
• 2.5 小鼠IgA肾病模型建立19-20
• 2.6 IgA肾病小鼠肾脏组织标本留取及常规染色20-22
• 2.6.1 肾脏组织取材20
• 2.6.2 肾脏组织冰冻及石蜡切片制作20
• 2.6.3 HE染色步骤20-21
• 2.6.4 PAS染色步骤21
• 2.6.5 Masson染色步骤21-22
• 2.7 小鼠IgA肾病模型鉴定22
• 2.7.1 直接免疫荧光法检测肾组织IgA、C3 沉积情况22
• 2.7.2 免疫荧光结果判定方法22
• 2.8 RT-qPCR检测肾组织中IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α、TGF-β mRNA的表达量22-24
• 2.8.1 肾组织总RNA提取22-23
• 2.8.2 反转录23
• 2.8.3 荧光定量PCR检测23-24
• 2.9 免疫组织化学方法检测肾组织中肾组织CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、 CD68+ 单核巨噬细胞浸润及IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α、TGF-β 的沉积24-26
• 2.9.1 PV两步法检测实验组及对照组小鼠肾组织中CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、CD68+ 单核巨噬细胞浸润及IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α、TGF-β 的表达量24-25
• 2.9.2 免疫组织化学结果判定方法25-26
• 2.10 统计学分析方法26-27
• 3 结果27-34
• 3.1 仙台病毒血凝价测定结果27
• 3.2 各组小鼠24小时蛋白尿量及血清肌酐、尿素氮的结果比较27
• 3.3 显微镜下观察各组小鼠肾组织病理改变27-29
• 3.3.1 各组小鼠肾组织IgA及C3 沉积情况27-28
• 3.3.2 各组小鼠肾组织光镜改变28-29
• 3.4 各组小鼠肾组织IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α、TGF-β mRNA相对表达量的比较29-30
• 3.5 各组小鼠肾组织CD4+、CD8+、CD68+阳性细胞浸润及IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α、TGF-β 等因子沉积情况30-32
• 3.6 各组小鼠肾脏组织炎症因子mRNA表达量与蛋白尿的相关性分析32-33
• 3.7 各组小鼠肾组织CD68+阳性细胞浸润及IL-1β、IL-6、MCP-1 的沉积情况与蛋白尿的相关性分析33-34
• 4 讨论34-37
• 5 结论37-38
• 参考文献38-40
• 综述 IgA肾病发病机制及治疗研究进展40-60
• 参考文献54-60
• 个人简历及在校期间发表的学术论文与研究成果60-61
• 致谢61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 段喜梅;张颖;刘璐;周雅丽;权松霞;邢国兰;;C3a、C5a及其受体在IgA肾病发病中的作用[J];郑州大学学报(医学版);2013年03期

2 张朝甲;张颖;刘璐;杜路;周雅丽;权松霞;邢国兰;;糖尿病肾病患者肾脏组织中C3aR、C5aR的表达[J];郑州大学学报(医学版);2014年02期

3 侯凡凡;伴有蛋白尿的IgA肾病的治疗[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2002年01期

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本文编号：321115