茶多酚联合表柔比星对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响及机制

发布时间：2017-04-25 01:06

  本文关键词：茶多酚联合表柔比星对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响及机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的据美国癌症学会《2015年癌症统计》称,2015年膀胱癌新增病人约56320,继续居男性新发肿瘤第4位,死亡病例约11510例。在所有这些病例中约70%以上为浅表性膀胱癌。目前对浅表性膀胱癌最主要的治疗手段是经尿道膀胱肿瘤切除加术后灌注化疗,但术后易复发,术后灌注化疗是影响膀胱癌复发的一个重要因素。如何提高化疗效果是目前临床亟待解决的科学问题。表柔比星(epirubicin,EPI)是膀胱癌的常用灌注化疗药物,茶多酚(polyphenols,TP)是一个重要的化疗增敏剂,本研究通过体外细胞实验,研究TP增强EPI诱导膀胱癌T24细胞凋亡的机制,为茶多酚联合表柔比星治疗膀胱癌的临床应用提供理论和实验依据。方法取不同浓度TP和EPI分别作用膀胱癌T24细胞24 h,经MTT试验初筛,选择药物作用浓度TP(88.8μmol/L)和EPI(4.6μmol/L)。试验分空白对照组、TP组(88.8 μmol/L).EPI组(4.6μmol/L)、联合组(TP 88.8μmol/L+EPI 4.6μmol/L)共4组分别处理对数生长期T24细胞24 h,用Annexin V-PI双流式细胞术检测各组细胞的凋亡率；处理T24细胞8h后,在透射电镜观察各组细胞胞质内自噬体的生成及变化；处理稳定表达GFP-LC3的T24细胞8 h后,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白LC3荧光斑的形成与变化；处理T24细胞不同时间,用Western blot技术检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ (8h)、P62 (8h),凋亡相关蛋白CASP3 (16h)、PARP (16h)表达变化；结果TP (88.8 μmol/L)、EPI (4.6 μmol/L)联合处理组较单药组引起的细胞增殖抑制率(F=730.411,P=0.000)和细胞凋亡率(F=161.945,P=0.000)显著提高。EPI (4.6μmol/L)单药处理T24细胞可以诱导自噬,电镜下细胞质内自噬体双层膜结构形成增多；荧光显微镜下胞质内有明显点状荧光斑聚集形成,且含荧光斑的细胞数量也明显增加,差异有统计学意义(F=41.944,P=0.000)；蛋白免疫印迹试验结果显示单独EPI处理T24,细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达增多,自噬底物蛋白P62表达降低；联合TP作用后自噬明显减弱,自噬相关蛋白表达降低,而凋亡相关蛋白活性显著增高。结论TP可以增强EPI诱导膀胱癌T24细胞凋亡敏感性,其机制与TP抑制EPI化疗过程中诱导的保护性自噬有关。
【关键词】：膀胱癌 自噬 茶多酚 表柔比星 T24细胞
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 1 材料和方法13-21
• 2 结果21-25
• 3 讨论25-28
• 结论28-29
• 参考文献29-32
• 文献综述32-43
• 参考文献38-43
• 致谢43-44
• 攻读学位期间发表的论文44

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