雪胆素乙对人前列腺癌细胞增殖的抑制作用及其分子机制研究

发布时间：2024-05-13 04:43

　　目的 雪胆素乙（DHCF）是从雪胆属植物中分离获得的葫芦烷型四环三萜类化合物。DHCF具有抗炎和抗肿瘤效应，但其作用机制的研究少见。本研究以人前列腺癌细胞株（LNCaP、DU145、PC3）为研究对象，分析DHCF的抗肿瘤效应，探讨其作用机制。 方法 MTS法检测细胞增殖状况；PI染色分析细胞周期分布；免疫荧光染色检测细胞骨架变化；Western Blot法检测细胞中特定蛋白的表达。 结果 MTS结果显示，DHCF以浓度依赖方式抑制LNCaP、DU145、PC3细胞株的增殖，对三种细胞的IC50值分别为5、7、15mol/L。PI染色结果显示，DHCF能使三种细胞的周期阻滞于G2/M期，但只有LNCaP细胞出现明显的凋亡峰。组织免疫荧光染色结果显示，20mol/L的DHCF处理4h后，癌细胞中G-肌动蛋白（actin）表达量减少，肌动蛋白纤丝发生聚集，形成杆状结构；但微管的结构变化不明显。同时，肌动蛋白形成的杆状结构和Cofilin形成的杆状结构呈现共定位，说明这种结构是Cofilin-actin棒。Western Blot结果显示，DHCF引起癌细胞中Cofilin磷酸化水平的明显降...

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
一、前言
    1 雪胆素乙的化学构成
    2 雪胆素乙的相关研究
        2.1 雪胆素的药理表现及机制
            2.1.1 抗炎活性
            2.1.2 抗肿瘤效应
            2.1.3 抗 HIV 作用
            2.1.4 肝损伤保护
            2.1.5 治疗胃肠道溃疡
            2.1.6 临床应用
        2.2 葫芦烷型四环三萜的抗肿瘤机制
            2.2.1 增强机体对癌症的免疫应答
            2.2.2 肿瘤迁移
            2.2.3 STAT3 信号通路
            2.2.4 MAPK 信号通路
            2.2.5 细胞骨架
            2.2.6 其他研究
    3 本课题的研究目的和意义
二、实验材料
    1 实验细胞株
    2 主要试剂
    3 主要仪器
三、实验方法与步骤
    1 三种人前列腺癌细胞株的培养与传代
    2 实验细胞分组
    3 检测雪胆素乙处理下三种细胞株的药物敏感性
        3.1 MTS 法
        3.2 细胞形态分析
        3.3 PI 染色
        3.4 Western Blot 检测细胞凋亡
            3.4.1 细胞总蛋白的制备
            3.4.2 蛋白定量
            3.4.3 蛋白检测
    4 雪胆素乙的抗癌机制探究
        4.1 组织免疫荧光染色
        4.2 Western Blot 检测细胞骨架及细胞周期蛋白
            4.2.1 肌动蛋白的制备
            4.2.2 蛋白检测
            4.2.3 蛋白膜的剥离
    5 统计分析
四、实验结果
    1 LNCaP、DU145、PC3 细胞株对雪胆素乙的药敏性检测
        1.1 雪胆素乙明显抑制前列腺癌细胞的增殖
        1.2 雪胆素乙引起细胞形态发生变化
        1.3 雪胆素乙诱导前列腺癌细胞周期阻滞于 G2/M 期
        1.4 雪胆素乙明显引发 LNCaP 细胞凋亡
    2 雪胆素乙的抗癌作用机制
        2.1 雪胆素乙引起 G-actin 减少，肌动蛋白细胞骨架发生明显的变化
        2.2 雪胆素乙引起 Cofilin 去磷酸化，诱使 Cofilin-actin 棒结构的形成
        2.3 雪胆素乙引起 p21Cip1表达上调，Cyclin A 表达下调
五、讨论
参考文献
全文总结
附录 I 主要溶液配方
附录 II 英文缩略词
附录 III 在校期间发表论文
致谢



本文编号：3972396