裸鼠肾癌模型中MiR-21与PDCD4相互作用的研究

发布时间：2017-06-08 16:21

  本文关键词：裸鼠肾癌模型中MiR-21与PDCD4相互作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:在肾细胞癌(RCC)细胞系和组织中,microRNA-21(mi R-21)下调程序性细胞死亡因子4(PDCD4)抑制细胞恶性转化,细胞的增殖和转移。本研究的目的是探讨裸鼠肾癌模型中,PDCD4和miR-21之间的相互作用关系和角色。方法:24只雄性BALB/c裸鼠随机分为三组(阴性对照组(n=8),miR-21inhibitor组(n=8),mi R-21 mimic组(n=8))。将786-O细胞移植到小鼠腋下,每天小鼠分别注射negative control siRNA,pre-mir-21(mimic)和anti-miR-21(inhibitor)。786-O细胞移植后16天,取下荷瘤小鼠的肿瘤并称重。另外,采用实时定量RT-PCR分析肿瘤组织中miR-21和PDCD4 mRNA的表达。在肿瘤组织中PDCD4蛋白的表达,采用免疫组织化学和Western blot检测。此外,786-O细胞分别转染PDCD4 siRNA和negative control siRNA,采用软琼脂集落形成,EDU增殖实验和侵袭迁移实验研究沉默PDCD4对肿瘤细胞生长、增殖、侵袭的影响。另取16只雄性BALB/c裸鼠随机分为两组:阴性对照组(n=8)和PDCD4 siRNA组(n=8),然后786-O细胞移植到腋下,试验小鼠每天分别注射negative control siRNA或PDCD4 siRNA,移植后16天,取下荷瘤小鼠的肿瘤并称重。结果:与阴性对照组相比,在miR-21 mimic组肿瘤重量明显增加,然而,在miR-21 inhibitor组肿瘤重量显著降低(P0.05)。与人肾癌组织和细胞系的结果类似,在裸鼠肾癌模型中,miR-21 mimic组中mi R-21的表达与阴性对照组相比显著上调,然而,在miR-21 inhibitor组miR-21的表达显著降低。此外,观察到在miR-21 mimic组PDCD4蛋白水平显着减少,而在miR-21 inhibitor组显著增加(P0.05),而三组肿瘤组织中PDCD4 mRNA的表达水平没有差异(P0.05)。在EDU增殖实验中,阴性对照组(NC组)的增殖率为(28.6±2.3)%,PDCD4 siRNA组的增殖率为(44.7±3.6)%,两组差异有统计学意义(P0.05)。在软琼脂集落形成实验以及迁移和侵袭实验中,PDCD4 siRNA转染组细胞中克隆形成和侵袭能力显著增加(P0.05)。此外,与阴性对照组相比,PDCD4 siRNA组肿瘤重量明显增加(P0.05)。结论:与人肾癌组织和细胞系的结果类似,miR-21在促进肾癌细胞生长、增殖和侵袭,且在裸鼠肾癌模型中,miR-21转录后下调PDCD4蛋白表达促进肿瘤生长。我们的结果与其它研究表明,在肾细胞癌中miR-21和PDCD4可能发挥II重要作用,提示增加PDCD4表达或抑制miR-21的表达可能是治疗肾癌的新的有效的治疗策略。
【关键词】：Mi R-21 PDCD4 裸鼠 肾细胞癌
【学位授予单位】：河南科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.11;R-332
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 第1章 绪论9-26
• 1.1 研究背景9-24
• 1.1.1 肾癌概述9
• 1.1.2 MicroRNA(miRNA)9-15
• 1.1.3 MicroRNA-21 (miR-21)与PDCD415-23
• 1.1.4 MiR-21，PDCD4与肾癌23-24
• 1.1.5 问题和展望24
• 1.2 研究目的24-25
• 1.3 研究意义25-26
• 第2章 材料和方法26-39
• 2.1 细胞株和实验动物26
• 2.2 试剂和实验设备26-28
• 2.2.1 试剂26-28
• 2.2.2 实验设备28
• 2.3 方法28-39
• 2.3.1 细胞培养和传代28-29
• 2.3.2 RNAi实验29-30
• 2.3.3 裸鼠肾癌模型建立30
• 2.3.4 引物设计30
• 2.3.5 免疫组化30-31
• 2.3.6 Western-blot31-33
• 2.3.7 qRT-PCR33-36
• 2.3.8 EDU增殖实验36-37
• 2.3.9 软琼脂集落形成实验37
• 2.3.10 细胞迁移和侵袭实验37-38
• 2.3.11 统计分析38-39
• 第3章 结果39-47
• 3.1 裸鼠肿瘤的重量和肿瘤组织HE染色39-40
• 3.2 下调miR-21可增加PDCD4的表达量40-47
• 3.2.1 裸鼠肿瘤miR-21和PDCD4 mRNA的表达量40-41
• 3.2.2 裸鼠肿瘤中PDCD4蛋白的表达41-42
• 3.2.3 沉默PDCD4促进 786-0 细胞的增殖、生长和侵袭42-47
• 第4章 讨论47-54
• 4.1 MiR-21在转录后水平下调PDCD4促进肿瘤生长47-49
• 4.2 沉默PDCD4后 786-0 细胞增殖能力增强49-50
• 4.3 沉默PDCD4后 786-0 细胞迁移和侵袭能力增强50-54
• 第5章 结论54-55
• 参考文献55-69
• 缩略语词汇表69-71
• 致谢71-72
• 攻读学位期间的研究成果72

【共引文献】

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本文编号：433101