人脐带间充质干细胞提取的微囊对大鼠肾缺血再灌注损伤肾组织中HIF-1α表达的影响

发布时间：2017-06-25 22:00

  本文关键词：人脐带间充质干细胞提取的微囊对大鼠肾缺血再灌注损伤肾组织中HIF-1α表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景及目的:肾缺血再灌注损伤(Renal ischemia reperfusion injury,RIRI)是急性肾动脉阻断和肾脏移植等临床治疗过程中比较常见的病理生理过程,为肾移植、休克肾、肾部分切除、肾盂积水等疾病的常见并发症。缺氧诱导因子-1(hypoxiainduciblefactor,HIF-1)是一种缺氧条件下于人和哺乳动物体内广泛存在的转录因子,可以激活许多缺氧反应性基因的表达,从而维持细胞在缺血缺氧状态下的生存。作为HIF-1活性的主要控制亚基,HIF-1α在缺血再灌注组织中的表达颇受关注。间充质干细胞能够通过旁分泌或内分泌的方式来减轻急慢性肾损害,而目前微囊被人们认为是细胞间彼此交流的重要媒介,能发挥和干细胞类似的肾保护功能。我们实验小组前期的实验发现脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)提取的微囊(microvesicles,MVs)对急性肾损伤有保护作用,然而其具体机制尚不完全清楚。因此本实验希望通过观察人脐带间充质干细胞提取的微囊对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,初步探讨HIF-1α在人脐带间充质干细胞提取的微囊发挥肾保护作用中可能的机制。方法:健康成年SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(ischemia-reperfusion ijury group以下称IRI组)和微囊治疗组(MVs treatment group,以下称MVs组),每组10只。采用右肾切除左肾缺血的方法制备肾脏缺血再灌注损伤模型,术中三组大鼠均切除右肾,IRI组及MVs组术中予动脉夹夹闭左肾动脉45min后松开,假手术组模拟手术操作过程但不夹闭左肾动脉。MVs组手术同时经尾静脉给予含100ug蛋白量的人脐带间充质干细胞(HMSCs)提取的MVs;,缺血再灌注组及Sham组术中经尾静脉注射等容量生理盐水;24h后急性处死大鼠立即通过下腔静脉采血,检测血Scr、BUN含量并同时切除左肾,取二分之一左肾置入4%多聚甲醛液中固定,以便进行切片PAS染色;二分之一左肾保存于-80℃冰箱中,以便采用weston-blot法进行检测各组肾组织HIF-1α表达水平。结果:与Sham组相比,IRI组肾脏病理损伤较重,表现为不同程度肾小球、肾间质充血,肾小管上皮细胞水肿、细胞内玻璃样变及脂肪变性,肾小管腔内蛋白管型明显,HIF-1α表达及血Scr、BUN水平表达明显升高,差异具有统计学意义(P0.05);而MVs组与Sham组相比较肾脏病理损伤略加重,血Scr、BUN水平表达略有升高,HIF-1α表达略有下降,差异不具有统计学意义(P0.05);与IRI组比较,MVs组肾脏病理损伤明显减轻,表现为个别标本存在蛋白管型,轻度水肿,血Scr、BUN水平显著降低,HIF-1α表达明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1.缺血再灌注损伤后肾组织HIF-1α的表达明显升高2.HUMSCs提取的MVs可以显著改善大鼠肾缺血再灌注肾损伤,具有肾保护作用3.HUMSCs提取的MVs能够降低缺血肾组织中HIF-1α的表达4.HIF-1α可能可以作为一个评估肾损伤程度的检测指标。
【关键词】：肾缺血再灌注损伤 缺氧诱导因子-1α 微囊
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 中英文名词对照12-13
• 前言13-15
• 第一章 人脐带间充质干细胞提取的微囊的获取和大鼠肾缺血再灌注模型的建立15-23
• 1.1 绪论15
• 1.2 材料与方法15-20
• 1.2.1 脐带的获取15
• 1.2.2 主要试剂15-16
• 1.2.3 主要仪器16-17
• 1.2.4 人脐带间充质干细胞微囊的获取17
• 1.2.5 细胞的传代17-18
• 1.2.6 细胞冻存与复苏18
• 1.2.7 人脐带间充质干细胞微囊透射电镜检测18
• 1.2.8 人脐带间充质干细胞来源的微囊的表面marker鉴定18-19
• 1.2.9 大鼠肾缺血再灌注模型的建立19-20
• 1.3 结果20-21
• 1.3.1 人脐带间充质干细胞的体外培养20
• 1.3.2 人脐带间充质干细胞来源的微囊透射电镜检测20-21
• 1.3.3 人脐带间充质干细胞来源的微囊表面marker流式分析鉴定21
• 1.4 讨论21-22
• 1.5 结论22-23
• 第二章 人脐带间充质干细胞提取的微囊对大鼠肾缺血再灌注损伤肾组织中HIF-1α表达的影响23-36
• 2.1 绪论23-24
• 2.2 实验方法24-29
• 2.2.1 实验动物24-25
• 2.2.2 主要试剂25-26
• 2.2.3 主要仪器26
• 2.2.4 各组大鼠的治疗干预及肾脏标本的取材与固定26-27
• 2.2.5 肾脏标本PAS染色：27
• 2.2.6 肾脏标本Western Blot检测27-28
• 2.2.7 肾脏组织中PKH-26 标记微囊的追踪28
• 2.2.8 肾功能检测情况28-29
• 2.2.9 统计学处理29
• 2.3 结果29-32
• 2.3.1 各组大鼠肾脏组织PAS染色29-30
• 2.3.2 各组大鼠肾功能及HIF-α表达的检测30-31
• 2.3.3 尾静脉注射脐带间充质干细胞来源的微囊后在大鼠肾内的追踪31-32
• 2.4 讨论32-35
• 2.5 结论35-36
• 参考文献36-41
• 致谢41

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5 记者　陈建强;首家间充质干细胞库在津建成[N];光明日报;2006年

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