FOXC1在肾透明细胞癌中的表达及对细胞增殖和周期的影响

发布时间：2017-08-11 02:00

  本文关键词：FOXC1在肾透明细胞癌中的表达及对细胞增殖和周期的影响

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【摘要】：目的：FOXC1为FOX蛋白超家族的成员之一,过去对于FOXC1的功能的研究主要集中于胚胎发育与基因遗传方面,而近期的研究发现FOXC1在肿瘤发生和发展的过程中起到了重要作用。目前,研究已证实FOXC1与乳腺癌、肺癌和肝癌等肿瘤的恶性程度密切相关,但在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达情况及其对肿瘤发生发展的作用及相关机制尚无明确研究报道。本课题通过对肾透明细胞癌及其癌旁组织中FOXC1的表达进行检测分析,并通过在肾癌细胞系中敲低及过表达FOXC1基因,观测其增殖变化,以了解FOXC1在肾透明细胞癌的发生发展中的作用,并为临床诊断治疗肾透明细胞癌提供靶标的基础实验依据。方法：1.收集我院60例肾透明细胞癌患者术后肿瘤及对应瘤旁冰冻标本,进行实时定量PCR (RT-PCR)实验、蛋白印迹(western-blot)实验及免疫组织化学染色实验(1HC),分别在核酸及蛋白水平检测FOXC1的表达量,并对这60例病例临床资料进行分析。2.通过RT-PCR及western-blot实验,检测正常肾小管上皮细胞株HK2,肾透明细胞癌细胞株769-P,786-O, OSRC-2中FOXC1的表达量。3.通过RNA干扰技术,转染FOXC1特异性干扰siRNA,下调细胞系786-O,769-P的FOXC1表达量,行平板克隆,MTS及细胞周期实验,观察分析其增殖变化。4.通过构建pLV-EGFP[1]-FOXC1过表达质粒,包装病毒,感染786-O,769-P细胞系,使其过表达FOXC1基因,通过平板克隆,MTS及流式细胞技术检测细胞周期实验,观察分析其增殖变化。结果：在肾透明细胞癌患者肿瘤冰冻标本中nRNA水平比相对应的瘤旁冰冻标本由FOXC1表达有显著下降(P0.05)。FOXC1在]mRNA水平不同性别、年龄、及TNM分期等分析均无统计学意义(P0.05),2.在肾透明细胞癌细胞系中成功转染siRNA-FOXC1, FOXC1表达下调后平板克隆实验及MTS实验显示细胞增值增高(P0.05),细胞周期实验显示低表达FOX Cl组G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高(P0.05)。细胞大量进入S期从而促进细胞增殖。3.成功构建pLV-EGFP-FOXC1质粒,并在肾透明细胞系中构建稳定过表达FOXC1细胞株。过表达FOXC1的细胞株在平板克隆实验及MTS实验中增值率降低(P0.05),细胞周期测定实验显示质粒组G1期细胞比例升高,细胞较少进入S期,使S期细胞比例均降低(P0.05),而G2期比例无显著差异(P0.05)。细胞被阻滞于G1/S期而抑制细胞增殖。结论：FOXC1在ccRCC中表达降低,与肿瘤的发生发展及恶性潜能相关；FOXC1对细胞增殖及细胞周期变化有较大影响,提示可能在ccRCC的发生发展过程中发挥抑癌基因的作用。
【关键词】：FOXC1 肾透明细胞癌 细胞增殖 细胞周期
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-8
• 前言8-10
• 第一部分 转录因子FOXC1在肾透明细胞癌组织中的表达及临床病理相关性10-22
• 1. 材料与方法10-18
• 2. 结果18-21
• 3. 小结21-22
• 第二部分 siRNA下调FOXC1表达对肾透明细胞癌细胞系增殖能力及细胞周期的影响22-29
• 1. 材料与方法22-25
• 2. 结果25-28
• 3. 小结28-29
• 第三部分 构建质粒上调FOXC1表达及对肾透明细胞癌细胞系增殖能力及细胞周期的影响29-38
• 1. 材料与方法29-33
• 2. 结果33-37
• 3. 小结37-38
• 讨论及结论38-41
• 参考文献41-44
• 综述：FOXC1基因在肿瘤中的作用与研究进展44-55
• 参考文献50-55
• 英文略缩词表55-56
• 攻读学位期间发表论文56-57
• 致谢57-58

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本文编号：653657