激光拉曼光谱系统下实时、非标记监测胰岛β细胞胞吐活动的研究

发布时间：2017-10-10 20:29

  本文关键词：激光拉曼光谱系统下实时、非标记监测胰岛β细胞胞吐活动的研究

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【摘要】：目的：在单细胞水平上实时监测胰岛β细胞胞外分泌胰岛素活动既往主要有以下传统的电生理学方法,如通常需要侵入性微电极穿刺或荧光蛋白标记的全内反射成像技术和双光子成像技术。本研究通过利用激光镊子拉曼光谱仪从胰岛β细胞边缘附近的区域捕获胞吐活动可能产生的拉曼散射信号,证实拉曼光谱系统能够实时监测胰岛p细胞胰岛素的胞吐活动,并建立拉曼光谱系统下细胞胞吐观察的实验体系。方法：本研究通过将高浓度葡萄糖、氯化钾作为刺激组,刺激胰岛p细胞胞外分泌胰岛素；而低浓度的葡萄糖和钙通道阻滞剂(硝苯地平)分别作为空白对照组和条件对照组。单细胞水平上应用：激光镊子拉曼光谱仪从细胞边缘附近的区域捕获可能的拉曼光谱散射信号；FM1-43染料鉴定胰岛p细胞胞吐位点。群体细胞水平上应用：放射免疫法测胰岛素含量,从而推测胰岛素分泌情况。结果：单细胞水平上：刺激前各实验组之间光谱信号差异无统计学意义(P0.05)；加入处理因素后,从刺激组细胞边缘捕获到的有意义的拉曼光谱信号不仅频率比空白对照组和条件对照组多,而且光谱信号强度较强,差异具有统计学意义(P0.05)；FM1-43染料染色后刺激组的细胞荧光强度较空白对照组和条件对照组强,差异具有统计学意义(P0.05),而高糖组与氯化钾组之间荧光强度无统计学意义(P0.05)。群体细胞水平上：刺激前各实验组胰岛素分泌量差异无统计学意义(P0.05),加入处理因素后刺激组胰岛素分泌量较空白对照组和条件对照组多,差异具有统计学意义(P0.05),且与时间没有关联性(P0.05)。结合胰岛p细胞细胞膜和胰岛素的拉曼光谱信号进行分析,发现本研究所捕抓的拉曼光谱信号类似于胰岛β细胞细胞膜的光谱信号,而与胰岛素的光谱信号相差较大。结论：1.胞吐活动中在细胞边缘所捕抓到的有意义拉曼光谱信号频率与胞吐活动的旺盛程度呈正相关。2.胞吐活动中在细胞边缘所捕抓到的有意义拉曼光谱信号类似于胰岛β细胞细胞膜的光谱信号。3.拉曼光谱技术可以作为一种非侵入性、非标记性地实时监测胰岛β细胞胞吐活动,特别是局部细胞膜空间结构及物理性质改变。
【关键词】：胞吐活动 单细胞光镊拉曼光技术 胰岛β细胞 拉曼光谱
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：O657.37;R587.1
【目录】：

• 个人简历3-5
• 英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-30
• 结果30-36
• 讨论36-40
• 结论40
• 参考文献40-43
• 综述43-55
• 综述参考文献50-55
• 致谢55-57
• 攻读硕士研究生期间发表的论文57

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本文编号：1008468