降脂酮、自组装OA-壳聚糖纳米颗粒对高脂诱导BRL-3A细胞胰岛素抵抗保护效果研究
本文关键词：降脂酮、自组装OA-壳聚糖纳米颗粒对高脂诱导BRL-3A细胞胰岛素抵抗保护效果研究
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【摘要】：【背景】胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)是指生理剂量胰岛素介导敏感靶器官(肝脏、骨骼肌及脂肪)的生物学效应低于正常,主要表现为糖、脂质、蛋白质代谢能力下降。目前对IR在疾病发生中的地位基本形成共识——“共同土壤”学说,即IR是2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)、代谢综合征(Metabolic syndrome,Met S)、高血压、非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)、高尿酸血症等聚集发病临床征候群的共同发病基础。长期处于IR状态的人群罹患心脑血管意外的风险明显升高。肝脏作为胰岛素作用的重要靶器官,可合成、储存与释放糖原,并与脂肪、蛋白质代谢密切相关。高能饮食可导致肝脏糖原合成与分解紊乱,糖异生增加,是高血糖主要成因之一。目前常用于建立IR的多为3T3-L1(脂肪细胞)、Hep G2(人肝癌细胞)细胞系等,而对于大鼠(常用实验动物)的正常肝细胞IR模型尚未见报道。因此建立IR肝细胞模型有助于研究IR及T2DM发生机制。T2DM治疗药物类型多样,但多存在非治疗副反应。近年关于中药治疗T2DM的研究取得了长足进步,人们对植物提取物的重新认识,让人们对其作用有效部位、作用机理进行研究,并对其改造后使之成为治疗T2DM的一支生力军。降脂酮(JZT)是一种从黄芪、山楂等6种中药中提取的总黄酮,齐墩果酸(Oleanolic acid,OA)是存在于植物叶和根的五环三萜类化合物,两者均有保肝作用,观察降脂酮和纳米化齐墩果酸(nano OA)对IR肝细胞的作用,探讨它们作为T2DM天然药物的可能性具有非常重要的意义。【目的】以BRL-3A细胞(大鼠肝细胞)为研究对象,研究PA构建IR模型的可能性及稳定性;检测棕榈酸(Palmitic acid,PA)诱导IR过程中细胞氧化应激水平变化,探讨氧化应激在IR中的作用;研究降脂酮和纳米化齐墩果酸对IR细胞模型糖脂代谢及氧化应激水平的影响,探讨它们作为T2DM治疗药物的可能性。【方法】1.细胞相对生存率检测:细胞分对照组、PA组及溶剂组处理完毕后,MTT法检测细胞相对生存率。2.PA对细胞基础葡萄糖消耗影响:细胞按实验分组处理完毕后吸弃孔内培养液,加入无血清RPMI-1640培养液继续培养24h,检测葡萄糖消耗量。3.PA对细胞胰岛素刺激葡萄糖消耗影响:细胞按实验分组处理完毕后吸弃孔内培养液,分对照和胰岛素刺激组处理后检测葡萄糖消耗量。4.PA对细胞生化指标影响:细胞按实验分组处理完毕后,检测TG、TC、HDL-C、LDL-C水平。5.IR模型稳定性评估:选取合适PA浓度及作用时间点处理BRL-3A细胞建模成功后,继续培养检测基础葡萄糖消耗和胰岛素刺激葡萄糖消耗变化。6.JZT对IR模型细胞氧化应激水平影响:选择不同浓度JZT预处理,加用PA处理后,采用流式细胞术检测细胞ROS水平,并用酶标仪检测CAT、T-AOC、MDA、GSH水平。7.JZT对IR模型细胞生化指标影响:选择不同浓度JZT预处理,加用PA处理后,检测基础葡萄糖摄取、TG、TC、HDL-C、LDL-C水平。8.nano OA对细胞影响:细胞分对照组、OA组及nano OA组处理完毕后,MTT法检测细胞相对生存率,检测葡萄糖消耗量、细胞ROS水平。9.nano OA对IR模型细胞生化指标影响:选择不同浓度预孵育后,加用PA处理,检测葡萄糖、TG、TC、HDL-C、LDL-C水平。10.nano OA对IR模型细胞氧化应激水平影响:细胞分对照组、OA组及nano OA组处理完毕后,采用流式细胞术检测细胞ROS水平,并用酶标仪检测MDA水平。【结果】1.50、100μmol/L的PA作用于BRL-3A细胞不超过12h,细胞生存率与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。随PA作用浓度增加和作用时间延长,细胞生存率比对照组显著降低(P0.05),存在时间及剂量依赖关系。2.50μmol/L的PA作用BRL-3A细胞不同时间后,消耗葡萄糖量与对照组相比差异均无统计学意义(P0.05)。随PA浓度增加和作用时间延长,BRL-3A细胞消耗葡萄糖量逐渐下降。100μmol/L的PA作用12h,BRL-3A细胞消耗葡萄糖量与对照组相比显著降低(P0.05)。3.PA作用浓度增加及作用时间延长,胰岛素刺激后细胞葡萄糖消耗量与同组细胞未刺激时相比差距逐渐下降。PA作用时间超过12h的细胞,胰岛素刺激后葡萄糖消耗量与未刺激时无明显变化。4.PA可增加细胞TG、TC、LDL-C水平,降低HDL-C水平。5.模型组BRL-3A细胞继续培养直至72h,其基础葡萄糖消耗与对照组细胞相比仍较低,且继续培养不同时间,细胞消耗葡萄糖量无明显变化(P0.05)。对照组在胰岛素刺激后细胞消耗葡萄糖量均增加(P0.05),模型组细胞继续培养直至72h,胰岛素刺激后细胞摄糖量与未刺激组无明显变化(P0.05)。6.JZT可以减少IR模型细胞ROS,降低MDA水平,增加CAT水平及T-AOC。7.JZT可以提高IR模型细胞基础葡萄糖摄取量,提高HDL-C水平,降低TG、TC、LDL-C水平。8.纳米化后可以减少OA对细胞相对生存率、ROS及葡萄糖消耗影响。9.nano OA与OA组相比,葡萄糖摄取量增加,TG、TC、LDL-C水平降低(P0.05),HDL-C水平增加(P0.05)10.nano OA与OA组相比,细胞ROS水平降低(P0.05),细胞MDA水平下降(P0.05)。【结论】1.100μmol/L浓度的棕榈酸作用12h可使BRL-3A细胞摄取葡萄糖能力下降、胰岛素敏感性减弱、脂质代谢紊乱,产生IR。2.IR模型BRL-3A细胞在正常培养72h内可保持稳定。3.降脂酮可以降低IR细胞氧化应激水平,并改善糖脂代谢水平。4.纳米化可以减轻齐墩果酸对细胞影响,降低细胞氧化应激水平,并改善糖代谢水平。5.纳米化齐墩果酸可以降低IR细胞氧化应激水平,并改善脂代谢水平。6.降脂酮和纳米化齐墩果酸可以作为改善胰岛素抵抗、治疗2型糖尿病候选药物进行后续研究。
【关键词】：胰岛素抵抗 活性氧 氧化应激 棕榈酸 降脂酮 齐墩果酸 纳米化
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.1
【目录】：
- 缩略语表5-7
- 中文摘要7-11
- 英文摘要11-16
- 前言16-17
- 文献回顾17-30
- 实验一 棕榈酸诱导BRL-3A细胞胰岛素抵抗模型的建立30-51
- 引言30
- 1 材料30-32
- 2 方法32-42
- 3 结果42-48
- 4 讨论48-51
- 实验二 棕榈酸诱导BRL-3A细胞胰岛素抵抗中氧化应激作用研究51-64
- 引言51
- 1 材料51-52
- 2 方法52-57
- 3 结果57-62
- 4 讨论62-64
- 实验三 降脂酮对棕榈酸诱导BRL-3A细胞胰岛素抵抗的保护效果研究64-78
- 引言64
- 1 材料64-66
- 2 方法66-67
- 3 结果67-76
- 4 讨论76-78
- 实验四 自组装OA-壳聚糖纳米颗粒对棕榈酸诱导BRL-3A细胞胰岛素抵抗的保护效果研究78-98
- 引言78
- 1 材料78-80
- 2 方法80-81
- 3 结果81-96
- 4 讨论96-98
- 小结98-99
- 参考文献99-110
- 个人简历和研究成果110-112
- 致谢112
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，本文编号：1096361
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