《宁夏医科大学》2014年硕士论文

  本文关键词：高表达MicroRNA-126诱导INS-1细胞凋亡的研究，由笔耕文化传播整理发布。

《宁夏医科大学》 2014年

高表达MicroRNA-126诱导INS-1细胞凋亡的研究

姬海玉  

【摘要】：研究背景糖尿病是以外周器官组织对胰岛素反应性降低和β细胞分泌胰岛素障碍为特征的代谢性疾病。随着生活水平和社会环境的改变，糖尿病的发病率逐年上升。正常β细胞的胰岛素分泌功能存在自反馈调节，以促进β细胞水平的胰岛素合成和分泌，β细胞的衰老及凋亡均使胰岛素分泌减少，也参与DM2的发病过程。有报道胰岛素信号通路可能存在miR-126的作用靶点。但是miR-126能否影响胰岛β细胞凋亡及增殖目前尚不明确，本课题在INS-1细胞模型过表达和低表达miRNA-126，观察对INS-1细胞凋亡和增殖的影响。 方法1、本实验以培养的INS-1细胞为模型，将其分别转染40nM的不同miRNA48小时，人工合成胰岛素100nM刺激细胞12小时。并用实时荧光定量PCR方法检测干扰INS-1细胞miR-126表达的效果。2、实验分为四组：A、阴性对照组（转染nonsensesegment，NC），B、miR-126过表达组（转染miR-126mimic），C、miR-126低表达组（转染miR-126inhibitor），D、miR-375mimic（阳性对照组）3、应用流式细胞仪、MTS等方法检测细胞凋亡和细胞活力变化；电子显微镜下观察细胞超微结构改变；免疫荧光细胞化学染色法检测凋亡相关蛋白Omi/HtrA2、XIAP和caspase-3的表达部位，以及利用定量技术ImagePro-Plus分析软件测定上述蛋白荧光强度值；利用Western Blot方法检测XIAP蛋白表达的变化。 结果1、实时荧光定量PCR检测显示：miR-126在NC、miR-126mimics、miR-126inhibitor三组中的相对表达量分别为221.45±23.08（n=3）、52.84±15.78（n=3）、10.86±2.52（n=3）。过表达组miR-126的表达量显著高于阴性对照组（P0.05），miR-126低表达显著低于阴性对照组（P0.05）。 2、流式细胞仪检测结果显示：miR-126mimic组和miR-375mimic组INS-1细胞凋亡数均显著高于NC组和miR-126inhibitor组（P0.05），而miR-126mimic组凋亡细胞数与miR-375mimic组间无明显差异（P0.05），NC组凋亡细胞数和miR-126inhibitor组间无明显差异（P0.05）；与之相应，MTS法检测INS-1细胞活力显示：miR-126mimic组和miR-375mimic组中细胞活力明显下降，低于NC组和miR-126inhibitor组，差异有统计学意义（P0.05），miR-126mimic组细胞活力与miR-375mimic组间无明显差异（P0.05），NC组细胞活力和miR-126inhibitor组间无明显差异（P0.05）； 3、电镜下可见：过表达组众多INS-1坏死细胞，多数细胞体积变小，细胞核折缝样改变，染色质高度浓缩、边集；线粒体空泡化改变，内质网扩张，，部分与细胞膜融合，出现发泡现象。NC组和低表达miR-126组偶见坏死细胞，多数细胞的亚细胞结构完整。 4、细胞免疫荧光结果显示四组INS-1细胞均有Omi/HtrA2和caspase-3蛋白表达，而XIAP蛋白表达仅限于胞核。Western Blot检测结果显示miR-126mimics组XIAP蛋白表达量分别明显低于NC组和miR-126inhibitor组。 结论：1、过表达miR-126、miR-375可以诱导INS-1细胞凋亡； 2、过表达miR-126和miR-375可能通过减少XIAP表达，促进细胞凋亡。

【关键词】：
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R587.1
【目录】：

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