早期糖尿病肾病循环MICRORNA指纹谱的建立及相关MIRNA基因启动子甲基化调控

发布时间：2016-12-02 14:31

  本文关键词：早期糖尿病肾病循环MICRORNA指纹谱的建立及相关MIRNA基因启动子甲基化调控作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

《重庆医科大学》 2013年

早期糖尿病肾病循环MICRORNA指纹谱的建立及相关MIRNA基因启动子甲基化调控作用的研究

查何  

【摘要】：目的建立早期糖尿病肾病（Diabetic nephropathy，DN）循环microRNA（miRNA）指纹谱，为糖尿病肾病的早期分子诊断和治疗提供依据。 方法使用PAXgene blood RNA tubes采集早期糖尿病肾病和糖尿病（Diabetes mellitus，DM）患者的新鲜血液各3例，Trizol法提取总RNA,YM-100微离心过滤柱富集片段小于300nt的小RNA，经过修饰处理后与含有最新版本探针序列（Version10.0microRNA数据库，）的RNA芯片杂交和特异性的荧光染料染色，经过软件分析和数据处理后，获得早期糖尿病肾病和糖尿病的差异表达谱。通过TaqMan MicroRNA Assays定量RT-PCR试剂盒对6个样本中的let-7a的表达水平进行定量检测，验证RNA芯片结果的可靠性。 结果RNA芯片检测结果显示早期糖尿病肾病和糖尿病血液中的miRNA有22个差异表达较明显的，通过比较共筛选出10个糖尿病肾病显著差异miRNAs，其中表达上调的miRNAs为5个，分别是hsa-miR-4429、 hsa-miR-4454、 hsa-miR-320e、 hsa-miR-320b和hsa-miR-320d，表达下调的miRNAs为5个，分别是hsa-let-7f、hsa-miR-363、hsa-let-7a、hsa-let-7d、hsa-miR-26a。通过定量RT-PCR检测了let-7a的表达水平，结果与芯片结果一致，表明芯片结果是可靠的。 结论早期糖尿病肾病和糖尿病患者的部分循环miRNAs表达具有显著差异，建立早期糖尿病肾病循环miRNA指纹谱可能为糖尿病肾病的早期分子诊断和治疗提供新的思路。 目的检测早期糖尿病肾病（DN组）、糖尿病（DM组）和正常人(CON组)全血DNA中let-7a-3基因启动子的甲基化水平，探讨基因启动子甲基化对let-7a表达的影响，，为研究调控早期糖尿病肾病的发生发展的分子机制提供新的线索。 方法荧光定量甲基化特异性PCR（qMSP）检测DN组、DM组和CON组全血DNA样本各20例的let-7a-3基因启动子甲基化率，PCR产物采用琼脂糖凝胶电泳和克隆测序的方法验证PCR反应的准确性。 结果qMSP法检测let-7a-3基因启动子的甲基化水平，显示DN组平均甲基化率为96.2%，DM组平均甲基化率为76.6%，正常组平均甲基化率为63.2%，经统计分析，DN组平均甲基化率明显高于DM组和正常组（P0.05），而DM组和正常组相比，增高并不明显（P＞0.05）。 结论早期糖尿病肾病患者let-7a-3基因启动子的甲基化水平明显增高，影响let-7a-3基因的表达，使得let-7a的表达量下降（RNA芯片和定量RT-PCR检测证实），很可能是调控早期糖尿病肾病发生发展的分子机制之一。

【关键词】：
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R587.2;R692
【目录】：

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本文编号：202015