齐墩果酸对肿瘤坏死因子-α诱导的成纤维样滑膜细胞炎症因子表达的影响及其机制研究

发布时间：2019-07-23 18:16

【摘要】：目的:齐墩果酸对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人成纤维细胞样滑膜细胞(Human fibroblast-like synoviocytes,HFLS)炎症因子表达的影响及其可能的分子机制,为齐墩果酸在类风湿关节炎中的应用提供理论依据。方法:1、体外培养并传代人成纤维细胞样滑膜细胞。2、实验方法:四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测HFLS活性,western blot蛋白检测法检测细胞p38MAPK及NF-κB p65的表达,RT-PCR检测白介素-6(Interleukin 6,IL-6)和白介素1β(Interleukin 1β,IL-1β)的表达,ELISA法检测HFLS上清液中IL-6和IL-1β的生成。3、实验分组:根据研究目的将实验分为3部分:(1)检测齐墩果酸对基础状态下HFLS的影响,将细胞分为6组:对照组及不同浓度齐墩果酸组(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L);(2)检测齐墩果酸对TNF-α诱导的HFLS炎症因子表达的影响,分为5组:对照组,TNF-α组及TNF-α+不同浓度齐墩果酸组(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L);(3)检测p38MAPK及NF-κB的蛋白表达变化,将细胞分为5组:对照组,TNF-α组,TNF-α+不同浓度齐墩果酸组(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L);(4)检测p38MAPK及NF-κB阻断剂对HFLS上清液中炎症因子生成的影响,分为5组:对照组,TNF-α组,TNF-α+齐墩果酸(20μmol/L)组,TNF-α+p38MAPK阻断剂组,TNF-α+NF-κB阻断剂组。结果:1、5μmol/L-20μmol/L的齐墩果酸对基础状态的HFLS的活性无明显影响(P0.05)。当浓度大于40μmol/L后,齐墩果酸明显抑制细胞活性(P0.05)。2、与对照组比较,TNF-α明显促进IL-6及IL-1β的mRNA表达,差异具有统计学意义(P0.05)。3、与TNF-α组比较,不同浓度齐墩果酸对TNF-α诱导的IL-6及IL-1β的mRNA表达均有抑制作用,并呈浓度依赖性(P0.05)。4、与对照组比较,TNF-α能促进p38MAPK的磷酸化,差异具有统计学意义(P0.05);与TNF-α组比较,齐墩果酸能抑制TNF-α诱导的p38MAPK磷酸化(P0.05),且呈浓度依赖性。5、与对照组比较,TNF-α能促进NF-κB核蛋白的表达,差异具有统计学意义(P0.05);与TNF-α组比较,齐墩果酸能抑制TNF-α诱导的NF-κB核蛋白的表达(P0.05)。6、加入p38MAPK阻断剂SB203580和NF-κB抑制剂Bay11-7082后,与TNF-α组比较,IL-6及IL-1β的生成明显减少(P0.05)。结论:1、TNF-α能促进HFLS细胞IL-6及IL-1β的表达和分泌,并促进p38MAPK的磷酸化及NF-κB核转位。2、齐墩果酸能抑制TNF-α诱导的HFLS炎症因子的表达(IL-6及IL-1β),并抑制TNF-α诱导p38MAPK的磷酸化及NF-κB核转位。3、齐墩果酸通过抑制p38MAPK及NF-κB信号通路,从而抑制HFLS细胞炎症因子的表达。
【图文】：

西 南 医 科 大 学 硕 士 学 位 论 文养及传代文献进行细胞的复苏及传代[4]，，简单叙述如下浴箱中进行约 1min 的解冻后，放入超净工作，放入到事先准备好的培养皿中，并加入完全养皿放入二氧化碳孵箱中。第二天将细胞取出长，为细胞换液后，此后每隔 2 天换液 1 次。，进行细胞传代。

人成纤维细胞样滑膜细胞（光镜×100倍）
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R593.22

【参考文献】

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本文编号：2518309