利拉鲁肽对人恶性肿瘤细胞增殖迁移凋亡影响的研究

发布时间：2019-07-28 15:02

【摘要】：随着环境和生活方式的改变,糖尿病和恶性肿瘤已经成为我国乃至全球的重要死亡原因。流行病学资料显示糖尿病患者并发恶性肿瘤的风险显著增加,糖尿病合并恶性肿瘤患者的降糖药物需要长期甚至终生使用,因此降糖药物是否会影响恶性肿瘤的发生发展及预后也就备受关注。2型糖尿病患者常用的降糖药物包括胰岛素、二甲双胍、胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-like peptide-1Receptor,GLP-1R)激动剂等。部分研究显示胰岛素可能会促进恶性肿瘤细胞的发生发展,二甲双胍可以抑制食管癌、胃癌、胰腺癌等多种恶性肿瘤的发生发展。GLP-1R激动剂是一种新型降糖药物,其良好的降血糖作用,且使用方便,因此受到越来越多糖尿病患者的青睐。GLP-1与GLP-1R结合后能够通过作用于PI(3)K、Wnt等信号通路从而影响细胞的增殖、凋亡,因此其可能会影响恶性肿瘤细胞的发生发展。目前关于GLP-1R激动剂的临床研究主要是集中于短效GLP-1R激动剂艾塞那肽与肿瘤之间关系的研究,现有的临床研究已经发现艾塞那肽能够抑制多种恶性肿瘤细胞的增殖、迁移,但对于长效GLP-1R激动剂利拉鲁肽研究还不多,此外既往关于GLP-1R激动剂的临床研究主要是集中在关于GLP-1R激动剂与胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌等肿瘤细胞生物学行为之间的研究,而关于其对结肠癌、胃癌、肺癌等恶性肿瘤的影响的临床研究目前还不多。因此本研究拟通过将长效GLP-1R激动剂利拉鲁肽作用于人结肠癌、胃癌、肺癌细胞系,观察其对肿瘤细胞增殖、迁移、凋亡等生物学行为的影响,为合并结肠癌、胃癌或者肺癌的2型糖尿病患者是否能够安全使用GLP-1R激动剂利拉鲁肽提供实验依据。目的:探讨新型降糖药物GLP-1R激动剂利拉鲁肽对人结肠癌HCT116、SW480细胞、人胃癌BGC823、SGC7901细胞、人肺癌H1299细胞生物学行为的影响,为合并2型糖尿病的肿瘤患者使用GLP-1受体激动剂是否安全提供实验依据。方法:1.将利拉鲁肽作用于HCT116、SW480人结肠癌细胞系、BGC823、SGC7901人胃癌细胞系、H1299人肺癌细胞,观察利拉鲁肽对肿瘤细胞生物学行为的影响,分别用CCK-8法检测利拉鲁肽对肿瘤细胞增殖能力的影响;细胞平板克隆实验检测利拉鲁肽对肿瘤细胞克隆形成能力的影响;划痕法检测利拉鲁肽对肿瘤细胞迁移能力的影响;流式细胞学技术检测利拉鲁肽对肿瘤细胞凋亡的影响。2.Q-PCR技术检测HCT116、SW480人结肠癌细胞系、BGC823、SGC7901人胃癌细胞系、H1299人肺癌细胞GLP-1R m RNA的表达情况。结果:1.GLP-1R激动剂利拉鲁肽作用于人结肠癌HCT116、SW480细胞24h、48h、72h、96h后,10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L药物组HCT116细胞、SW480细胞在不同作用时间及作用浓度时的细胞增殖率与对照组相比无明显变化(P0.05);利拉鲁肽作用于人结肠癌HCT116、SW480细胞48h后,与对照组相比,1000nmol/L药物组HCT116细胞和SW480细胞的细胞克隆形成率分别为96.33%、98.01%(P0.05),与对照组相比,克隆形成数目和大小无明显差异;HCT116细胞对照组、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L药物组肿瘤细胞迁移距离分别为37.70±1.70μm、34.64±2.17μm、37.82±1.78μm、36.61±2.14μm,SW480细胞对照组、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L药物组肿瘤细胞迁移距离分别为26.47±2.24μm、26.90±1.88μm、23.21±0.61μm、25.08±2.17μm(与对照组相比,P0.05);HCT116细胞对照组、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L利拉鲁肽药物组的肿瘤细胞凋亡率分别为3.03%、2.83%、3.57%、3.60%,SW480细胞对照组、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L利拉鲁肽药物组的肿瘤细胞凋亡率分别为3.00%、3.40%、4.23%、4.17%(与对照组相比,P0.05)。2.GLP-1R体激动剂利拉鲁肽作用于人胃癌BGC823、SGC7901细胞24h、48h、72h、96h后,10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L药物组BGC823、SGC7901细胞在不同作用时间及作用浓度时的细胞增殖率与对照组相比无明显变化(P0.05);利拉鲁肽作用于人胃癌BGC823、SGC7901细胞48h后,与对照组相比,1000nmol/L药物组BGC823细胞和SGC7901细胞的细胞克隆形成率为97.33%、103.01%(P0.05),与对照组相比,克隆形成数目和大小无明显差异;BGC823细胞对照组、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L药物组肿瘤细胞迁移距离分别为23.73±1.47μm,21.24±0.80μm、22.27±1.27μm、20.52±0.55μm,SGC7901细胞对照组、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L药物组肿瘤细胞迁移距离分别为31.08±1.95μm,31.27±1.75μm、30.52±2.48μm、28.14±1.13μm(与对照组相比,P0.05);BGC823细胞对照组、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L利拉鲁肽药物组的肿瘤细胞凋亡率分别为2.20%、2.03%、2.30%、2.07%,SGC7901细胞对照组、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L利拉鲁肽药物组的肿瘤细胞凋亡率分别为5.63%、5.73%、5.87%、5.50%(与对照组相比,P0.05)。3.GLP-1受体激动剂利拉鲁肽作用于人肺癌H1299细胞24h、48h、72h、96h后,与对照组相比,10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L药物组肿瘤细胞在不同作用时间及作用浓度时的细胞增殖率与对照组相比无明显变化(P0.05);利拉鲁肽作用于人肺癌H1299细胞48h后,与对照组相比,1000nmol/L药物组肿瘤细胞细胞克隆形成率为101.33%(P0.05),与对照组相比,克隆形成数目和大小无明显差异;对照组、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L药物组肿瘤细胞迁移距离分别为23.27±1.51μm,25.07±1.91μm、23.74±1.47μm、25.48±2.91μm(与对照组相比,P0.05);对照组、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L利拉鲁肽药物组的肿瘤细胞凋亡率分别为2.00%、2.37%、2.17%、1.90%(与对照组相比,P0.05)。4.Q-PCR技术检查结果显示HCT116、SW480人结肠癌细胞系、BGC823、SGC7901人胃癌细胞系、H1299人肺癌细胞中均无GLP-1R mRNA的表达。结论:在人结肠癌细胞HCT116、SW480、人胃癌细胞BGC823、SGC7901以及人肺癌H1299细胞中均未检测到GLP-1R m RNA的表达,GLP-1R激动剂利拉鲁肽对人结肠癌细胞、人胃癌细胞、人肺癌细胞的增殖、迁移、凋亡均无影响。
【图文】：

图 1.CCK-8 法检测利拉鲁肽对人肿瘤细胞增殖3.2 细胞平板克隆实验检测利拉鲁肽对肿瘤细响细胞平板克隆实验结果显示：GLP-1R 激动剂利拉鲁HCT116、SW480、人胃癌细胞 SGC7901、BGC823 以及人与对照组相比，各药物组肿瘤细胞克隆形成数目和大小GLP-1R 激动剂利拉鲁肽对人结肠癌细胞 HCT116、SW4SGC7901 以及人肺癌 H1299 细胞克隆形成能力无影响（HCT116 SW480 BGC823 SGC对照组

2. 平板克隆实验检测利拉鲁肽对肿瘤细胞克隆能力的影测利拉鲁肽对人肿瘤细胞迁移能力的影响检测利拉鲁肽对人肿瘤细胞迁移能力影响的利拉鲁肽作用于人结肠癌细胞 HCT116、SW4823 以及人肺癌细胞 H1299 48h 后，与对照组相离无显著性变化(P > 0.05)，，GLP-1R 激动剂利拉SW480、人胃癌细胞 BGC823、SGC7901 以及人 3、4，表 1）。10 nmol/L 100 nmol/L
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R587.1;R73

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本文编号：2520138