塞来昔布对糖尿病胃轻瘫大鼠胃排空的影响及其机制研究

发布时间：2019-07-29 19:38

【摘要】：糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis, DGP)是糖尿病常见的消化道并发症,随着糖尿病发病率的增加,其发病率也将逐渐增加。目前DGP发病机制仍不十分明确,治疗效果不尽人意,严重影响患者生活质量,深入研究其发病机制和寻找新的治疗方法显得尤为重要。胃排空异常是DGP的重要病理生理特点,大量资料表明,花生四烯酸代谢通路与糖尿病及其并发症有关,其中胃平滑肌环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2, COX-2)及其产物可能与胃排空有关,DGP胃排空异常是否与胃窦平滑肌COX-2有关,尚不清楚。目的：探讨塞来昔布(celecoxib)对糖尿病胃轻瘫大鼠胃排空的影响及其可能的机制。方法：雄性SD大鼠随机分为实验组和正常对照组。实验组(n=14)一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin, STZ) 50mg/kg后高糖高脂饲料喂食;正常对照组(normal control,NC组,n=7)腹腔注射等量磷酸盐缓冲液并标准饲料喂养。8周后将实验组大鼠随机分为糖尿病胃轻瘫组(DGP组,n=7)、塞来昔布组(CE组,n=7)；CE组灌胃塞来昔布40mg/(kg·d)共21天。半固体糊排空率法检测大鼠胃排空；荧光定量PCR检测胃窦平滑肌中COX-2和5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX) mRNA表达；Western blot及免疫组织化学法检测胃窦平滑肌COX-2和5-LOX蛋白表达；酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测前列腺素E2(Prostaglandin E2, PGE2)表达；透射电镜观察胃窦平滑肌细胞超微结构。结果：1.DGP大鼠半固体胃排空率较正常对照组显著降低[(38.5±2.3)%vs(57.8±2.9)%,P0.01],CE组胃排空率显著高于DGP组[(49.3±3.5)%vs(38.5±2.3)%,P0.01]。2.DGP大鼠胃窦平滑肌组织COX-2 mRNA表达较正常对照组显著升高(2.075±0.580 vs 1.015±0.191,P0.01),CE组大鼠胃窦平滑肌组织COX-2 mRNA表达较DGP组显著下降(1.108±0.210 vs 2.075±0.580,P0.01)。DGP大鼠胃窦平滑肌组织5-LOX mRNA表达较正常对照组显著升高(4.414±0.843 vs 1.09±0.542,P0.05),CE组大鼠胃窦平滑肌组织5-LOX mRNA表达较DGP组显著升高(10.603±2.764 vs4.414±0.843,P0.01)。3.免疫组化结果显示胃窦平滑肌COX-2主要在胞浆和胞膜表达。DGP组大鼠胃窦平滑肌组织COX-2蛋白较正常对照组显著升高(0.195±0.014 vs 0.04±0.006,P0.01),CE组大鼠胃窦平滑肌组织COX-2蛋白表达较DGP组明显下降(0.061±0.008 vs 0.195±0.014,P0.01)；5-LOX主要在胞浆和胞膜表达,DGP大鼠胃窦平滑肌组织5-LOX蛋白表达较正常对照组显著升高(0.083±0.029 vs 0.033±0.006,P0.05),CE组大鼠胃窦平滑肌组织5-LOX蛋白表达较DGP组显著升高(0.336±0.027 vs 0.083±0.029,P0.01)。4.Western blot检测显示：DGP组大鼠胃窦平滑肌组织COX-2蛋白较正常对照组显著升高(1.048±0.162 vs 0.279±0.059,P0.01),CE组大鼠胃窦平滑肌组织COX-2蛋白表达较DGP组显著下降(0.411±0.154 vs 1.048±0.162,P0.01)；DGP大鼠胃窦平滑肌组织5-LOX蛋白表达较正常对照组显著升高(0.121±0.009 vs 0.061±0.018,P0.05),CE组大鼠胃窦平滑肌组织5-LOX蛋白表达较DGP组显著升高(0.790±0.040 vs 0.121±0.009,P0.01)。5.ELISA结果显示：DGP组胃大鼠窦平滑肌组织中PGE2表达较正常对照组显著增加[(1984.3±163.2)pg/g tissue vs(860.4±95.4)pg/g tissue,P0.01]。CE组胃窦平滑肌PGE2表达较DGP组显著降低[(1330.5 ±182.5)pg/gtissue vs(1984.3±163.2)pg/g tissue,P0.01]。6.大鼠胃窦平滑肌超微结构：正常大鼠胃窦平滑肌细胞一般呈梭形,细胞核比较规则,呈长椭圆形,核膜相对平滑,肌丝、密斑及密体可见,线粒体较多。DGP组大鼠胃窦平滑肌细胞细胞核不规则,核膜皱缩明显,线粒体肿胀、空泡化。CE组大鼠超微结构得到改善,仅见少量髓鞘样结构。结论：1.塞来昔布可显著改善DGP大鼠胃排空延迟。2.DGP发生与胃窦平滑肌COX-2/PGE2通路上调有关。3.塞来昔布可下调DGP大鼠胃窦平滑肌COX-2/PGE2通路。4.DGP大鼠胃窦平滑肌细胞超微结构受损；塞来昔布可以改善DGP大鼠胃窦平滑肌细胞异常病变。
【图文】：

ＮＣ组蛋白表达无显著差异（氏０．０５）；邋ＤＧＰ组大鼠胃窦平滑肌姐织中５－ＬＯＸ蛋白逡逑表达较ＮＣ组显著增加（尸＜０．０５），ＣＥ组中５－ＬＯＸ蛋白表达较ＤＧＰ组显著增加逡逑（於０．０１），且明显高于ＮＣ组表达（户＜０．０１），见图２．２和表２．６。逡逑２９逡逑

岕皱少而巧，肌丝、密斑及密体可见，线粒体较多。ＤＧＰ组大鼠胃窦平逡逑滑肌细胞细胞核不规则，核膜皱缩明显，线粒体肿胀、空泡化。ＣＥ组大鼠超微结逡逑构得到改善，仅见少量髓销样结构，见图２．３。逡逑WWW逡逑ＤＧＰ组逦ＣＥ组逦ＮＣ组逡逑图２．３大鼠巧寞平巧肌逢射电镜逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．３邋Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ邋ｅｌｅｃｔｒｏｎ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ邋ｆｏｒ邋ｓｍｏｏｔｈ邋ｍｕｓｃｌｅ邋ｏｆ邋ｇａｓｔｒｉｃ邋ａｎｔｒａｌ逡逑４讨论逡逑环氧合酶是花生四稀酸代谢生成前列腺素（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ，ＰＧ）的关键酶，反应逡逑产生的ＰＧ参与机体的多种生理及病理过程。ＣＯＸ有ＣＯＸ－１和ＣＯＸ－２两种形式。逡逑ＣＯＸ－１属于结构型基因，又称＂管家基因＂，在多数组织细胞中表达较低，参与维逡逑持机体正常生理功能；ＣＯＸ－２为可诱导型ＣＯＸ，正常状态下表达很低，，当受到刺逡逑激后便迅速表达合成，参与多种病理生理过程ｌｉｙ。ＣＯＸ－２抑制剂能显著改善由肤逡逑高血糖素诱导的急性胃轻痛动物的液体胃排空在调节胃肠道运动中起到了逡逑非常重要的作用，内源性前列腺素可节律性抑制动物胃窦自发性电活动及机械活逡逑３１逡逑
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2

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本文编号：2520716