协同刺激分子OX40L在2型糖尿病合并大血管病变中的作用及意义

发布时间：2019-10-13 18:38

【摘要】：随着人民生活水平的提高,生活方式西方化及人口老龄化,人类健康面临的慢性疾病威胁正日益加重,其中糖尿病及其慢性并发症更是危害健康的无情杀手。近年来研究认为,2型糖尿病(T2DM)是一种免疫相关性慢性炎症性疾病,机体免疫调节异常可能在T2DM及其并发症的发生、发展中发挥了至关重要的作用。协调刺激分子OX40L是肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)成员,与其特异性受体OX40相结合,为T、B细胞的长效激活提供第二信号[1],发挥重要的免疫调节作用。本课题通过流式细胞技术以及ELISA法检测单纯糖尿病患者、糖尿病合并颈动脉斑块患者和糖尿病合并急性心肌梗死患者外周血中单核细胞表面OX40L和可溶性OX40L(s OX40L)的水平变化,分析膜型和可溶性OX40L在糖尿病大血管病变发生发展中的生物学作用。一、OX40/OX40L信号通路在2型糖尿病合并大血管病变中的表达及意义目的探讨2型糖尿病及其合并大血管病变患者外周血免疫细胞表面OX40/OX40L和血清中可溶性OX40L(s OX40L)的表达变化。方法采用免疫荧光标记流式细胞技术检测A组(单纯2型糖尿病组,42例)、B组(2型糖尿病合并颈动脉斑块组,31例)、C组(2型糖尿病合并急性心肌梗死组,25例)、D组(健康对照组,33例)人群外周血免疫细胞膜表面OX40和OX40L的表达水平,ELISA法检测四组血清s OX40L的浓度。结果四组人群中,外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞表面OX40的表达差异均无统计学意义(P0.05)。与D组比较,A、B、C三组CD14+单核细胞表面OX40L的表达均上调(P0.01);C组CD14+单核细胞表面OX40L表达水平高于A组、B组(P0.01、P0.05)。与D组相比,A、B、C组患者血清s OX40L的水平明显升高(P0.01),C组患者血清s OX40L的表达水平高于A组、B组(P0.01、P0.05)。结论论2型糖尿病患者外周血单核细胞表面及血清中上调表达OX40L,其表达水平与糖尿病大血管病变严重程度密切相关。二、高糖对单核细胞表面OX40L以及可溶性OX40L表达的影响及生物学意义目的探讨高糖对单核细胞表面OX40L分子表达和培养上清中可溶性OX40L产生的影响,观察高糖对单核细胞生物学作用的影响。方法(1)收取健康人外周血,淋巴细胞分离液(Ficoll)分离出外周血单个核细胞(PBMCs),贴壁1~2h后,移除悬浮细胞,收集贴壁细胞即为CD14+单核细胞(纯度可达90%左右);(2)实验分组均以不同浓度葡萄糖(5.5、11、22、33mmol/L)加入培养基中干预CD14+单核细胞,分别于12h、24h、36h、48h收细胞和培养上清;(3)应用流式细胞术检测CD14+单核细胞表面OX40L的表达;(4)应用ELISA试剂盒检测细胞培养上清中s OX40L和TNF-α的含量。结果(1)流式结果显示:高糖浓度组单核细胞表面OX40L表达较对照组均显著增加(P0.05),且呈浓度和时间依赖性(P0.05);(2)ELISA检测结果显示:高糖浓度组培养上清中s OX40L水平较对照组显著增高(P0.05),且各浓度组之间有明显差异(P0.05);同时高糖促进炎症因子TNF-α的水平升高。结论高浓度葡萄糖上调单核细胞OX40L和s OX40L的表达,且与炎症因子水平相关。表明高糖通过单核细胞协同刺激分子的表达增加了炎症效应。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2

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