雌二醇和黄体酮联用对STZ所致卵巢切除小鼠糖尿病发生的预防作用研究

发布时间：2020-03-30 06:49

【摘要】：目的:雌激素和孕激素与糖尿病发生关系密切,其在糖尿病发生发展过程中的作用与机体所处的生理状态及血中雌、孕激素水平有关,而且二者联用作用如何还不完全清楚。因此,本文通过腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ),建立小鼠1型糖尿病模型,探讨雌、孕激素在糖尿病发生发展中的相互作用和关系,为糖尿病诊治及性激素在糖、脂代谢中的作用提供理论依据。方法:购买雌性昆明小鼠,切除卵巢,术后恢复一周,随机分为11组,分别为:(1)卵巢切除组(OVX),(2)卵巢切除+腹腔注射STZ(OVX+STZ),(3)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下注射0.01mg/kg体重17β-雌二醇(E0.01),(4)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下注射0.1mg/kg体重17β-雌二醇(E0.1),(5)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下注射1mg/kg体重17β-雌二醇(E1),(6)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下注射0.1mg/kg体重黄体酮(P0.1),(7)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下注射2mg/kg体重黄体酮(P2),(8)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下注射8mg/kg体重黄体酮(P8),(9)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下合并注射0.1mg/kg体重雌二醇和0.1mg/kg体重黄体酮组(EP0.1),(10)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下合并注射0.1mg/kg体重17β-雌二醇和2mg/kg体重黄体酮(EP2),(11)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下合并注射0.1mg/kg体重17β-雌二醇和8mg/kg体重黄体酮(EP8)。STZ按每天50mg/kg体重的剂量连续腹腔注射5天,同时隔天皮下注射黄体酮、17β-雌二醇或联合注射17β-雌二醇和黄体酮。每周测血糖和体重1次。给药五周后,进行糖耐量和胰岛素抵抗实验,同时部分小鼠摘眼球采血后颈椎脱臼处死,分别冻存和固定组织,采用HE染色对胰岛细胞进行观察,利用化学发光法和Elisa技术检测血清中黄体酮、17β-雌二醇、C肽(C-Peptide)及胰岛素(Insulin)水平,通过RT-PCR及免疫荧光技术检测骨骼肌糖转运蛋白4(GLUT4),肝脏糖转运蛋白2(GLUT2),葡萄糖激酶(Gck),葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P),磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PCK)及胰岛素受体(Insulin receptor,IR)的表达水平。结果:STZ所致的1型糖尿病小鼠血糖明显升高,体重下降,出现糖尿症;糖耐量明显受损,胰岛细胞萎缩,C肽和胰岛素分泌明显减少;骨骼肌GLUT4和肝脏Gck表达下调,肝脏GLUT2、G-6-p和PCK表达明显上调,但无明显的胰岛素抵抗,胰岛素受体表达也无明显变化。中剂量(0.1mg/kg体重)和大剂量(1mg/kg体重)17β-雌二醇可明显延缓STZ所致小鼠1型糖尿病的发生,使其血糖降低;低剂量(0.01mg/kg体重)17β-雌二醇无明显影响。中剂量(0.1mg/kg体重)的17β-雌二醇还可改善糖耐量,保护胰岛细胞,使C肽和胰岛素分泌增加,骨骼肌GLUT4和肝脏Gck表达上调,肝脏GLUT2、PCK和G-6-P表达显著下调。中剂量(2mg/kg体重)黄体酮单独给药可明显延缓STZ所致小鼠1型糖尿病的发生,保护胰岛细胞,使C肽和胰岛素分泌增加,降低血糖;黄体酮还可使骨骼肌GLUT4和肝脏Gck表达上调,肝脏GLUT2、PCK和G-6-P表达显著下调,但剂量不同,作用效果不同,且不表现剂量效应关系,对糖耐量也无明显改善作用。低剂量(0.1mg/kg体重)和中剂量(2mg/kg体重)黄体酮与17β-雌二醇(0.1mg/kg体重)联合给药对STZ所致小鼠1型糖尿病发生的延缓作用、胰岛细胞的保护作用、C肽和胰岛素的分泌及血糖降低作用均具有一定的协同效应;但对于骨骼肌GLUT4及肝脏GLUT2、Gck、PCK和G-6-P的表达,低剂量(0.1mg/kg体重)和大剂量(8mg/kg体重)黄体酮与17β-雌二醇0.1mg/kg体重联用主要表现出拮抗效应,而中剂量(2mg/kg体重)黄体酮与0.1mg/kg体重17β-雌二醇联用主要表现出协同效应。结论:1.17β-雌二醇和黄体酮单独给药均可延缓STZ所致小鼠1型糖尿病的发生,但不表现剂量效应关系;皮下注射中剂量的17β-雌二醇(0.1mg/kg体重)和黄体酮(2mg/kg体重)可使血药浓度达到生理剂量范围,可明显抑制STZ所致小鼠血糖的升高。2.17β-雌二醇和黄体酮延缓糖尿病发生机制是多方面的,可能与其保护胰岛细胞、促进胰岛素释放、改变骨骼肌葡萄糖转运及肝脏糖代谢有关。3.生理剂量的黄体酮与17β-雌二醇联用对17β-雌二醇延缓糖尿病的发生及影响糖转运和糖代谢具有一定的协同效应,可加强17β-雌二醇对糖尿病的预防作用。
【图文】：

1型糖尿病,小鼠,体重,和血

兰州大学研究生硕士学位论文雌二醇和黄体酮联用对 STZ 所致卵巢切除小鼠糖尿病发生的预防作用研究第三章结果糖尿病小鼠的建立腔注射 STZ 的模型组小鼠与 OVX 对照组相比，体重增长缓慢，，且在五周和第六周末体重明显低于 OVX 组（Fig. 1A）；血糖在术后第二也就是造模第一周至第五周末）显著升高（P<0.001）（Fig. 1 B）；结果并无显著性差异（Fig. 2）。

糖尿病小鼠,体重,和血,给药

兰州大学研究生硕士学位论文雌二醇和黄体酮联用对 STZ 所致卵巢切除小鼠糖尿病发生的预防作用研究.2 17β-雌二醇对糖尿病小鼠空腹体重和血糖的影响如 Fig. 3 所示，与模型组 OVX+STZ 相比，三种剂量（0.01、0.1 和 1mg/k7β-雌二醇使 STZ 所致糖尿病小鼠体重有升高趋势（P >0.05）（Fig. 3A）； 1mg/kg 体重的雌二醇给药时，小鼠在术后第二周末（也就是给药第一周末糖明显下降（P <0.01），在术后第三周、第四周、第五周末（也就是给药三周和第四周末）血糖下降更为显著（P <0.001）（Fig. 3B）。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R587.1

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