硫酸软骨素对过量氟暴露所致神经损害的干预作用及机制

发布时间：2020-04-22 04:04

【摘要】：目的观察细胞外调节蛋白激酶(Erk)1/2、磷酸化(phospho)-Erk1/2、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9在实验性慢性氟中毒大鼠脑组织中的改变及硫酸软骨素的治疗作用及机制。方法将30只清洁级SD大鼠,按体质量(100~120g)采用随机数字表法分为对照组(饮用自来水,氟含量0.5 mg/L)、染氟组(氟离子:10.0 mg/L)和硫酸软骨素处理组(氟离子:10.0 mg/L,染氟90 d后0.66 mg/kg硫酸软骨素连续腹腔注射5 d),每组10只,实验周期为95 d。采用Morris水迷宫方法检测大鼠行为学变化,蛋白质免疫印迹法检测脑组织中Erk1/2、phospho-Erk1/2、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,HE染色观察大鼠大脑神经元的形态学改变,免疫组织化学法检测大鼠脑组织顶叶皮质、海马CA2、CA3区phospho-Erk1/2、MMP-2、MMP-9的蛋白表达及分布情况。将人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞分为对照组(正常培养液)、染氟组(氟离子:4.0 mmol/L)和硫酸软骨素处理组(氟离子:4.0 mmol/L、硫酸软骨素:0.4mg/ml)。染氟72 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测经不同浓度硫酸软骨素处理后细胞存活率,锥虫蓝(Trypan Blue)染色观察三组细胞存活数量并计算细胞存活率;染氟24h,电子显微镜观察SH-SY5Y细胞超微结构变化。结果动物实验结果显示,对照组与硫酸软骨素处理组搜索策略以趋向式为主,趋向式搜索次数(2.20±1.09、3.40±1.34)高于染氟组(0.40±0.54),P均0.05]。染氟组phospho-Erk1/2的蛋白表达(3.26±0.88)较对照组和硫酸软骨素处理组升高[(1.53±0.28)、(2.36±0.87),P均0.05]。免疫组织化学结果显示,染氟组大鼠脑海马CA2区phospho-Erk1/2的平均灰度值(2.10±0.27)较对照组(1.50±0.08)升高,硫酸软骨素处理组(1.30±0.18)较染氟组(2.10±0.27,P0.05)降低;海马CA3区硫酸软骨素处理组(0.87±0.06)较对照组(1.71±0.42,P0.05)降低。染氟组和硫酸软骨素处理组大鼠脑顶叶皮质区MMP-2平均灰度值[(0.47±0.13)、(0.99±0.25)]较对照组(2.00±0.34,P均0.05)降低,硫酸软骨素处理组(0.99±0.25)较染氟组(0.47±0.13,P0.05)升高。染氟组大鼠脑顶叶皮质、CA2和CA3区MMP-9平均灰度值[(1.34±0.70)、(1.12±0.23)、(1.52±0.29)]均较对照组[(2.81±1.33)、(2.59±0.29)、(2.34±0.35),P均0.05]降低;硫酸软骨素处理组大鼠脑海马CA2、CA3区[(1.87±0.16)、(2.22±0.16)]均较染氟组[(1.12±0.23)、(1.52±0.29),P均0.05]升高。细胞实验结果显示,硫酸软骨素处理组SH-SY5Y细胞存活率[(0.92±0.23)%]和细胞计数[(7.83±1.38)×10~6]明显高于染氟组[(0.55±0.02)%、(2.19±1.26)×10~6,P均0.05]。电镜下观察经硫酸软骨素处理组细胞内吞饮小泡较多,仍有线粒体及内质网肿胀但相对染氟组较少。结论硫酸软骨素对慢性氟中毒所致的神经损害具有一定的拮抗作用,对神经细胞具有一定的保护作用。Erk1/2通路可能通过调节MMP-2和MMP-9表达维持细胞生存内环境稳定。
【图文】：

表 2-2. 实验性慢性氟中毒大鼠脑组织中 phospho-Erk1/2、Erk1/2表达水平（x—± s，，n =10）Table 2-2. Expression of phospho-Erk1/2,Erk1/2,MMP-2 and MMwith experimental fluorosis组别phospho-Erk1/2 Erk1/2 MM对照组 1.53 ± 0.28 1.61 ± 0.47 2.39 染氟组 3.26 ± 0.88a2.12 ± 1.46 1.72 CS 处理组 2.36 ± 0.87ab1.38 ± 0.60 2.58 F 值 67.92 0.64 1P 值< 0.05 > 0.05 >

表 2-3. 免疫组化测定大鼠大脑顶叶皮质 phospho-Erk1/2 蛋白表达(x—± s)Table2-3. Expression of phospho-Erk1/2 in the occipital cortex of rat brainsdetected by IHC(x—± s)分组 n 顶叶对照组 5 1.91 ± 0.34染氟组 5 1.00 ± 0.38CS处 理组5 1.28 ± 0.25F值 1.56P值 >0.05
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R599.1

【参考文献】

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本文编号：2636123