基于RA血清抗体结合反应关节滑膜组织抗原的质谱鉴定及瓜氨酸修饰表位验证

发布时间：2020-04-24 22:04

【摘要】：目的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种具有高度异质性的多系统自身免疫性疾病。本研究探究RA滑膜组织差异表达的蛋白,瓜氨酸化蛋白及瓜氨酸修饰位点,对上调的蛋白和瓜氨酸短肽进行生物学功能分析,寻找与RA具有高相关性的短肽,并研究瓜氨酸修饰短肽与血清ACPA的结合活性及用于RA的诊断价值。方法采用Thermo Q Exactive HF质谱技术鉴定RA血清抗体结合反应滑膜组织的抗原,瓜氨酸化蛋白及其修饰位点;采用在线软件STRING、Cytoscape软件、在线软件SYFPEITHI进行生物信息分析;利用ELISA检测原理,以合成COL6A3、KRT10的2条瓜氨酸修饰短肽(COL6A3_C:QDVVNAV-(Cit)-QLTLLGG;KRT10-C:RLAADDF-(Cit)-LKYENEV)为靶抗原,分别用HRP标记抗人IgA、IgG和IgM抗体为二抗,检测血清ACPA与两种抗瓜氨酸短肽抗体的结合活性,并对两种短肽用于RA诊断进行效果评价。结果(1)质谱共鉴定出594种蛋白,其中RA抗CCP抗体(+)组有125种蛋白表达上调,RA(-)抗CCP抗体组有87种蛋白表达上调,共鉴定57种瓜氨酸修饰蛋白及97个修饰位点;(2)RA抗CCP抗体(+)组上调蛋白主要参与白细胞活化、调节胞吐作用、补体激活、调节凝血过程和急性炎症反应;RA抗CCP抗体(-)组上调蛋白主要参与组织发育、上皮细胞角化、蛋白质折叠和物质分解代谢过程。COL6A3的短肽序列QDVVNAVRQLTLLGG与MHC-Ⅱ类分子的结合力较高;(3)抗COL6A3_C短肽抗体的ELISA检测值(以抗人IgM为二抗)用于RA诊断的灵敏度为65.52%,特异度为78.95%,阳性预测值82.61%,阴性预测值60%,ROC曲线下面积为0.724,但该类抗体在用于诊断抗CCP抗体(-)RA患者的ROC曲线下面积可达0.956。抗KRT10_C短肽抗体的ELISA检测值(以抗人IgG为二抗)用于RA诊断的灵敏度为58.62%,特异度为52.17%,阳性预测值60.71%,阴性预测值52.17%,ROC曲线下面积为0.686,仅用于诊断抗CCP抗体(+)RA患者的ROC曲线下面积为0.895。结论(1)从RA滑膜组织中鉴定出瓜氨酸修饰抗原,为RA存在瓜氨酸修饰提供了直接证据。(2)RA抗CCP抗体(+)组上调蛋白主要参与免疫反应过程,RA抗CCP抗体(-)组上调蛋白主要参与细胞生长发育。COL6A3与RA的相关性较高,可能是RA自身抗体的靶抗原。(3)抗COL6A3_C短肽抗体仅用于抗CCP抗体(-)RA患者的诊断价值较高,抗KRT10_C短肽抗体仅用于抗CCP抗体(+)RA患者的诊断效果较好,将两种抗短肽抗体加入RA实验室诊断体系,可提高RA的诊断率。
【图文】：

type I cytoskeletal 15（KRT15）、actin， gamma-enteric smooth mussoform 1 precursor （ ACTG2 ） 、 protein AATF （ AATF ）hromodomain-helicase-DNA-binding protein 5 （ CHD5 ）、 Meckelin isoformTMEM67）、centrosome-associated protein 350（CEP350）、type II inositol 3-bisphosphate 4-phosphatase（INPP4B）、G-protein coupled receptor family C gro member A precursor（GPRC6A）、intraflagellar transport protein 81 homosoform 1（IFT81）、fibromodulin precursor（FMOD）；仅在 RA 抗 CCP 抗体（特异性表达 69 种蛋白，FOT 值最高的前十种为 keratin， type I cuticular HKRT31）、keratin， type I cuticular Ha6（KRT36）、keratin， type I cytoskele9（KRT19）、keratin， type II cytoskeletal 73（KRT73）、histone H2B type 1HIST1H2BK）、histone H2A type 3（HIST3H2A）、putative trypsin-6 isoformPRSS2）、keratin，， type II cuticular Hb3（KRT83）、peroxiredoxin-4 precurPRDX4）、mucin-like protein 1 precursor（MUCL1）。

江苏大学硕士学位论文（T-complex protein 1 subunit beta isoform 2，CCT2）、玻连蛋白前体（vitronectinprecursor， VTN），Node degree 为 15 的是纤维蛋白原β链同种型 1 前原蛋白（fibrinogen beta chain isoform 1 preproprotein， FGB）、载脂蛋白 E 前体（apolipoprotein E precursor，APOE）、凝血酶原蛋白前体（ prothrombinpreproprotein，F2）。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R593.22

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本文编号：2639436