腺苷在视网膜新生血管形成中的作用

发布时间：2017-03-23 20:15

  本文关键词：腺苷在视网膜新生血管形成中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景： 视网膜新生血管性疾病如糖尿病性视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy，PDR)、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞等造成的渗出、出血等病理改变可导致严重的视力损害，甚至失明。对于此类疾病，目前应用最广的抗VEGF治疗和其它方法均不足以持续高效抑制血管生成，而玻璃体切除手术也只是对其造成视网膜脱离等并发症的无奈之举。视网膜新生血管的形成是一个非常复杂的过程，在此过程中，腺苷具有重要作用。研究表明，腺苷或其拟似物可以通过上调VEGF、IGF-1、bFGF、IL-8、Ang-2等促血管生成因子，以及下调抑制血管生成因子，如TNF-a等，来诱导血管新生。这就提示，腺苷作为体内广泛存在的生理调质，对于视网膜血管生成可能具有重要启动作用，因此，开展从源头上抑制视网膜新生血管产生的研究，具有重要意义。 目的： 本研究拟通过探讨临床视网膜新生血管性疾病患者玻璃体腔腺苷浓度与血管生成间的关系，结合动物实验明确阻断腺苷作用对于视网膜血管新生的抑制效应，从而证实腺苷具有促进视网膜新生血管形成的作用，为视网膜新生血管性疾病的发病机制和干预策略提供新的研究方向和治疗靶点。 方法： 1.收集在本院眼科行玻璃体切除手术的患者共30例，根据患者有无视网膜新生血管，分为增殖性糖尿病视网膜病变(PDR共16例16眼）组和对照组（孔源性视网膜脱离、黄斑前膜、特发性黄斑裂孔共14例14眼）。于患者玻璃体切除手术中收集玻璃体、视网膜增殖膜及黄斑前膜。应用HPLC检测患者玻璃体腺苷的浓度和诱导腺苷生成的关键酶-CD73的活性，Western Blot检测膜样本中CD73蛋白的表达。 2.选用C57BL/6J健康新生鼠建立OIR（Oxygen-induced retinopathy，氧诱导视网膜病变）动物模型，出生后第7天（P7）放入高氧环境中连续饲养5天，然后置入空气中继续饲养。正常对照组小鼠在空气中饲养。模型组和正常对照组小鼠于P17天行DiI心脏灌注视网膜铺片，荧光显微镜下观察视网膜新生血管形态；视网膜组织切片HE染色后计数突破视网膜前膜的血管内皮细胞核数目。于P13、P15、P17天提取两组小鼠视网膜组织，高效液相色谱仪（HPLC）检测视网膜腺苷浓度；Western Blot检测视网膜CD73的表达差异。随机选取模型组小鼠在出氧仓后连续5天腹腔内注射非选择性腺苷受体拮抗剂XAC（Xanthine amine congener,黄嘌呤胺同源物），阴性对照组小鼠腹腔内注射同等剂量的0.1%DMSO（Dimethyl Sulfoxide,二甲基亚砜），观察XAC对视网膜新生血管的抑制作用。 结果： 1. HPLC检测人眼玻璃体腺苷浓度在PDR组表达高于对照组[(63.50±11.60) μmol/Lvs (30.34±6.41)μmol/L]，差异具有统计学意义（P=0.000）。 2. PDR组患者的年龄、糖尿病病程、术前空腹血糖均与玻璃体腺苷浓度无相关关系（r=0.255，P=0.340；r=0.318，P=0.230；r=0.341，P=0.197）。 3. Western Blot检测增殖膜CD73酶在PDR组表达高于对照组（0.84±0.08vs0.39±0.05），差异均具有统计学意义（P=0.002）。 4. HPLC检测2组临床膜样本E-ADO的生成量，结果显示反应20min时，PDR组生成E-ADO的量较对照组高（54.1±7.1vs21.9±2.9），差异有显著统计学意义（P=0.002)。 5. P17行心脏灌注视网膜铺片结果显示：模型组小鼠视网膜自视乳头向中周部大片无灌注区，视网膜大血管走行迂曲，不规则扩张，可见新生血管丛；正常对照组小鼠视网膜血管未见明显异常。视网膜组织切片HE染色结果显示：模型组小鼠可见大量突破视网膜前膜血管内皮细胞核，，与正常对照组P17小鼠相比其突破视网膜前膜血管内皮细胞核计数具有显著性差异[(41.7±6.1)个/片vs (2.7±1.9)个/片；p=0.000]。 6.正常对照组小鼠在P13、P15、P17天每毫克视网膜腺苷含量分别为：（0.048±0.008）ng、（0.069±0.004）ng、（0.52±0.007）ng；OIR模型组小鼠在P13、P15、P17天每毫克视网膜腺苷含量分别为：（0.839±0.043）ng、（1.066±0.108）ng、（1.369±0.107）ng。在P13、P15、P17天，两组视网膜组织腺苷水平相比，差异均具有统计学意义（P0.01）。 7. OIR模型组和正常对照组相比，CD73蛋白在P13、P15、P17天时OIR模型组视网膜组织中均表达上调（P=0.003；P=0.001；P=0.000）。 8. P17行DiI心脏灌注视网膜铺片结果显示：XAC注射组小鼠视网膜较DMSO注射组视网膜无灌注区及新生血管丛数量减少。视网膜组织切片HE染色结果显示：XAC注射组突破视网膜前膜的血管内皮细胞核数目较DMSO注射组减少，差异有显著统计学意义[（17.3±3.9）个/片vs（38.1±5.6）个/片；p=0.000]。 结论： 1.视网膜新生血管性疾病患者玻璃体及增殖膜腺苷浓度和CD73表达均高于对照组，提示腺苷及诱导其生成的酶CD73可能参与了视网膜新生血管性疾病的病理过程。 2.动物实验进一步证实腺苷及CD73蛋白参与了鼠视网膜新生血管的发病过程。腺苷稳态失衡可能是视网膜新生血管生成的启动因素。 3.腺苷受体拮抗剂可抑制OIR模型视网膜新生血管的形成，提示腺苷受体有可能成为视网膜新生血管疾病的治疗靶点。
【关键词】：腺苷 CD73 视网膜新生血管 增殖性糖尿病视网膜病变 氧诱导视网膜病变
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R774.1;R587.2
【目录】：

• 缩略语表4-6
• Abstract6-9
• 摘要9-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 增殖性糖尿病视网膜病变患者视网膜新生血管与玻璃体腺苷浓度关系的研究14-27
• 2.1 研究对象与方法14-23
• 2.2 结果23-25
• 2.3 讨论25-27
• 第三章 腺苷在视网膜新生血管形成中的作用研究27-41
• 3.1 材料和方法27-33
• 3.2 结果33-38
• 3.3 讨论38-41
• 全文结论41-42
• 参考文献42-46
• 文献综述46-55
• 参考文献51-55
• 攻读硕士学位期间发表文章55-56
• 致谢56

【参考文献】

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1 王丽;CD73在肿瘤血管新生中的作用[D];复旦大学;2008年

  本文关键词：腺苷在视网膜新生血管形成中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：264507