血浆外泌体miR-92a-3p在系统性红斑狼疮中的作用及其机制研究

发布时间：2020-05-11 22:02

【摘要】：系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者体内可产生大量自身抗体,引起全身多系统、多器官的炎症反应和组织功能受损。肾脏是最常见的受累器官之一。既往研究已证实,SLE发病与体内细胞异常凋亡和凋亡细胞清除障碍有关。SLE患者体内T细胞、B细胞、NK细胞以及肾小球细胞等多种细胞都存在异常凋亡的现象。作为机体内细胞间信号物质传递的载体,外泌体在正常生理和病理过程中都发挥着重要的作用,可影响蛋白清除、抗原呈递、免疫反应、遗传物质交换和肿瘤转移等。外泌体可将废弃的蛋白质、核酸及各种代谢废物排出胞外,因此外泌体对于来源细胞内环境的稳态至关重要。同时,外泌体还能将其内含的遗传物质,如mRNA、miRNA和lncRNA等,传递到靶细胞内,调节基因表达并影响靶细胞内相关通路活性。最新研究发现,外泌体与包括类风湿性关节炎、SLE和干燥综合征在内的多种自身免疫性疾病的发病有关。多项研究表明,SLE患者血浆外泌体miRNA存在异常表达。但是,有关外泌体及其内部miRNA对SLE的作用机制却鲜有报道,他们是否能够通过调控血液或组织细胞凋亡参与SLE进展也是未知。本课题围绕血浆外泌体及其内部异常miRNA对SLE的影响及其潜在机制进行探究。我们发现来源于SLE患者血浆的外泌体,一方面能够促进PBMC细胞凋亡并上调炎症细胞因子表达;另一方面还能够被肾小管上皮细胞HK2摄取,促进HK2细胞凋亡。通过高通量测序和RT-PCR验证,我们发现miR-92a-3p在SLE患者血浆外泌体中显著下调,且与疾病活动程度和狼疮性肾炎有关。此外,miR-92a-3p水平还与患者24小时尿蛋白、补体C3和C4水平显著相关,但与患者性别、年龄、病程、是否服用免疫抑制剂和自身抗体水平无关。提示miR-92a-3p有望成为SLE诊断、判断疾病活动以及狼疮性肾炎评估的潜在标志物。为了进一步探究血浆外泌体miR-92a-3p影响SLE的机制,我们利用miRNA数据库对miR-92a-3p的靶基因进行预测,并用双荧光素酶报告系统和Western Blot方法进行验证。结果表明,miR-92a-3p能够通过与LATS2基因3'UTR不完全互补抑制LATS2基因表达,并抑制下游YAP/TAZ磷酸化。肾组织免疫组织化学染色结果显示,LATS2在肾小管上皮细胞中高表达,在肾小球中低表达或不表达,且SLE患者肾小管和肾小球中LATS2水平略高于正常肾组织。此外,miR-92a-3p还可促进PBMC和HK2细胞凋亡和炎症细胞因子表达。综上所述,我们发现SLE患者血浆外泌体能够通过调节PBMC和肾组织细胞凋亡及炎症反应影响疾病活动。而这一作用的实现可能与外泌体中miR-92a-3p及其靶基因LATS2有关。课题对外泌体在SLE中的作用提出了新的见解,有利于深入了解SLE发病机制,同时也为寻找新的SLE诊断或病程监测标志物和潜在的药物靶点提供了新思路。
【图文】：

自身免疫反应,患者,凋亡,自身抗体

识别自身核抗原，并分化为能够产生自身抗体的浆细胞。此外，，树突状细胞还逡逑能直接对Ｂ细胞产生刺激作用。由此，引发一系列连锁的免疫反应使ＳＬＥ患者逡逑病症加重（如图１）。逡逑３逡逑

调节作用,抗原呈递细胞,树突细胞,免疫调节

Ｂ淋巴细胞和树突状细胞等专职的抗原呈递细胞（ａｎｔｉｇｅｎ－ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ邋ｃｅｌｌｓ，ＡＰＣｓ）逡逑分泌的外泌体。这些外泌体表面具有抗原多肽，可在免疫调节中发挥重要作用［２４，逡逑气如图２所示，Ｂ细胞、树突细胞和巨噬细胞来源的外泌体，以及Ｔ细胞来源逡逑的外泌体具有重要免疫调节功能。逡逑５逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R593.241

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