21-羟化酶缺陷症基因诊断方法的建立及应用

发布时间：2017-03-26 19:17

  本文关键词：21-羟化酶缺陷症基因诊断方法的建立及应用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的建立一种荧光偏振检测技术联合直接测序法诊断先天性肾上腺皮质增生症中21-羟化酶缺陷症的新方法,并对中国人群中最常见的2种基因缺失和8种点突变进行检测。方法收集40例健康者及2例患者外周血,提取基因组DNA。设计通用引物,同时扩增CYP21A2和CYP21A1P等位基因片段,然后用序列特异的TAMRA荧光标记探针对扩增产物进行杂交检测,利用荧光偏振仪检测扩增杂交的荧光偏振值,确定是否存在该基因的缺失,同时用直接测序法验证检测结果;对Exon3Del 8bp(GAGACTAC)缺失进行检测时,将缺失的8个碱基设计在引物上,确保引物的特异性。同时根据CYP21A2基因与其假基因序列差异,设计5对特异性引物扩增CYP21A2基因,PCR后直接测序检测中国人群中最常见的8种点突变,包括P30L、i2g、I172N、E6Cluster、V281L、920-921insT、Q218X、R356W。结果荧光偏振法未检测到CYP21A2基因大片段缺失,检测结果与直接测序法结果对比差异无统计学意义(P0.05),一致率达100%,40例健康者未检测到点突变,1例患者检测出Exon1G56R,Exon7c.920-921InsT插入杂合突变,1例患者检测出Exon4I172N、Exon8Q318X杂合突变。结论荧光偏振检测法联合直接测序法诊断21-OHD是一种高效的检测手段,可以广泛用于临床,不仅能对患者基因突变类型进行分析,在指导遗传咨询及产前诊断方面亦发挥重要作用。
【作者单位】： 第四军医大学唐都医院内分泌科;
【关键词】： 先天性肾上腺皮质增生症 -羟化酶缺乏症 荧光偏振 CYPA基因
【分类号】：R440;R586
【正文快照】： 先天性肾上腺皮质增生症(CAH)是一组由于肾上腺皮质激素合成途径中的必需酶基因的缺陷所引起的一种常染色体隐性遗传病,是引起两性畸形最常见的病因[1]。其中,90%~95%的CAH由21-羟化酶基因缺陷所致[2]。由21-羟化酶缺陷引起的先天性肾上腺皮质增生症的发病率为1∶16 000~1∶20

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 李丁;张菊;颜真;张贺龙;郭宴海;刘文超;李小惠;李宏伟;;荧光偏振技术分析全血XPD基因单核苷酸多态性的研究[J];分析化学;2010年04期

2 姜英浩;张潍;俞青苗;强少盈;梁平;程红;高艳娥;赵星烨;张菊;;宫颈癌中EGFR启动子甲基化荧光偏振技术检测方法研究[J];现代生物医学进展;2014年11期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 张程;焦肖霞;成永强;李正平;;支化滚环扩增均相光散射检测单核苷酸多态性[J];分析化学;2011年07期

2 黎司;虞丹尼;何强;周光明;吉芳英;谭雪梅;;高铁酸钾降解苯并[a]芘的偏振三维荧光(PEEM)研究[J];光谱学与光谱分析;2013年06期

3 姜英浩;张潍;俞青苗;强少盈;梁平;程红;高艳娥;赵星烨;张菊;;宫颈癌中EGFR启动子甲基化荧光偏振技术检测方法研究[J];现代生物医学进展;2014年11期

4 王晓黎;张楠;赵玉岩;史晓光;单忠艳;;两种新复合型CYP21A2突变致单纯男性化型21羟化酶缺陷症[J];中国医科大学学报;2014年05期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 姜英浩;宫颈癌表皮生长因子受体基因启动子甲基化的荧光偏振检测研究[D];第四军医大学;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 李丁;张菊;颜真;张贺龙;郭宴海;刘文超;李小惠;李宏伟;;荧光偏振技术分析全血XPD基因单核苷酸多态性的研究[J];分析化学;2010年04期

2 倪原;张菊;陈国绍;陈智利;杨利红;;基于荧光偏振技术的基因检测分析系统[J];生命科学仪器;2008年09期

3 赵晨;张亮;倪原;;荧光偏振技术在生命科学中的研究进展[J];现代生物医学进展;2010年16期

4 强少盈;张菊;姜英浩;刘文超;;肺癌患者EGFR基因启动子甲基化状态研究[J];现代肿瘤医学;2012年10期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 ;荧光偏振法──细胞和分子生物学领域的一种新工具[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;1997年02期

2 董志伟;;荧光偏振技术在肿瘤研究中的应用[J];生理科学进展;1978年01期

3 丰美福;吴政安;刘树森;董志伟;王杰;万文徽;;淋巴细胞的分离及其荧光偏振检测[J];细胞生物学杂志;1980年03期

4 王志彬;张学晶;王愈聪;高金鹏;李正平;;基于荧光偏振的高灵敏度蛋白激酶活性分析[J];化学学报;2013年12期

5 彭长德;刘莹;兰秀风;陆建;倪晓武;;血液静态荧光偏振光谱研究[J];光学学报;2006年10期

6 刘秀德;隋义壮;李广文;;荧光偏振技术在男性不育症研究中的应用[J];山东中医学院学报;1990年02期

7 孙■,岳海涛,杨世杰,陈光荣,徐洋;荧光偏振法测定红细胞膜脂流动性[J];白求恩医科大学学报;1993年02期

8 赵晨;张亮;倪原;;荧光偏振技术在生命科学中的研究进展[J];现代生物医学进展;2010年16期

9 牛冬云;连炜;邬智刚;郝晓峰;柯潇;;荧光偏振法测定融合蛋白制剂中聚山梨醇酯20的含量[J];中国生物制品学杂志;2014年05期

10 曾伟成,杨辉,蔡钦榕,罗友华,黄亦琦;虎杖鞣质的荧光偏振分析[J];海峡药学;2002年06期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 李佳涵;章悦;李冉;张星河;赵光远;刘义;;荧光偏振技术测定药物对线粒体膜的流动性的影响[A];第一届全国生物物理化学会议暨生物物理化学发展战略研讨会论文摘要集[C];2010年

2 胡善明;赵显峰;荫士安;孟晶;徐青梅;;荧光偏振法测定脑神经细胞膜脂流动性[A];中国营养学会第七届全国营养学术会议论文摘要汇编[C];1996年

3 许晋;齐玉梅;王广义;张明;杨辉;;荧光偏振法测定家兔血小板膜脂流动性的研究[A];第11届中国营养学会全国临床营养学术会议论文（摘要）汇编[C];2007年

4 刘小蓉;章悦;李冉;刘义;;荧光偏振法测定线粒体膜的流动性[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年

5 黄勇;金雪;赵书林;;基于纳米材料和核酸信号放大的高灵敏荧光偏振分析[A];中国化学会第十七届全国有机分析与生物分析学术研讨会论文集[C];2013年

6 马辉;;荧光偏振成像及其应用[A];中国光学学会2006年学术大会论文摘要集[C];2006年

7 马晓翠;邱阳;黄力新;林克椿;聂松青;;红外光谱、荧光偏振研究海藻糖对POPE脂质体Lα→H_Ⅱ相变的影响[A];第三届全国现代生物物理技术学术讨论会论文摘要汇编[C];2000年

8 许耘川;袁向亮;沈立松;;HPLC法测定血清甲氨蝶呤浓度的方法建立及其与荧光偏振法的比较[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年

9 殷明;王近中;辛佩珠;薛建华;赵可明;项光强;;乙醇对大鼠红细胞膜荧光偏振的影响[A];第二届全国人—机—环境系统工程学术会议论文集[C];1995年

10 焦凯;江华;张菊;王香玲;;模板指导的末端延伸反应与荧光偏振检测方法在eNOS基因单核苷酸多态性研究的应用[A];中国生理学会2004年消化内分泌生殖学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 记者 刘云涛;我国首次利用荧光偏振技术筛选新药[N];中国医药报;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 姜英浩;宫颈癌表皮生长因子受体基因启动子甲基化的荧光偏振检测研究[D];第四军医大学;2014年

2 申铜飞;基于DNA探针的荧光检测技术研究[D];聊城大学;2014年

3 赵晓萍;沙丘芦苇所含独特化合物对细胞膜流动性的影响[D];兰州大学;2008年

  本文关键词：21-羟化酶缺陷症基因诊断方法的建立及应用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：269259