尿酸在氧化应激状态下对血管内皮细胞损伤机制的研究

发布时间：2017-03-27 19:12

  本文关键词：尿酸在氧化应激状态下对血管内皮细胞损伤机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：尿酸是人体内嘌呤代谢的最终产物,随着人们生活水平的提高、饮食条件的改善及环境与遗传因素的改变,高尿酸血症已成为威胁人类身体健康疾病之一。越来越多的流行病学研究发现尿酸的升高与心血管疾病、肾脏疾病以及代谢综合征等密切相关。研究发现尿酸可为一种抗氧化物质,生理浓度下的尿酸对内皮细胞可起到一定的保护作用,也有研究证实高浓度的尿酸也会转化为促氧化物质而对内皮细胞进行损害。那么轻度的尿酸升高是否也会影响内皮细胞的增殖及死亡,给予一定的氧化刺激后是否会加重内皮细胞的损伤,目前缺乏这方面的研究。通过对不同浓度的尿酸和氧化应激状态下尿酸升高对内皮细胞损伤机制的研究,期望有助于探讨临床无症状高尿酸血症或伴有高脂血症、糖尿病等造成氧化应激状态情况下尿酸升高是否要进行早期预防与治疗。目的：1)通过不同浓度的尿酸(UA)及H202刺激体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后的增殖情况,一氧化氮(NO)的合成,膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的分泌,观察氧化应激状态下UA升高对血管内皮细胞功能的影响；2)通过观察氧化应激状态下不同浓度UA对HUVECs p38MAPK蛋白表达的变化及使用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后它们的改变,探讨p38MAPK信号通路是否参与氧化应激状态下UA对HUVECs损伤机制的研究。方法：1)以原代HUVECs 4-6代为实验对象,设立单纯尿酸组(0、4、6、8、10mg/dlUA)及尿酸+过氧化氢组(0、4、6、8、10mg/dl UA+100μmol/l H2O2)两个实验组。2)UA及H202刺激HUVECs 24h后,通过CCK-8法检测HUVECs的活力,硝酸还原酶法检测细胞培养上清液中NO的含量,化学发光法测定超氧化物歧化酶(SOD)水平,硫代巴比妥法测定细胞膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)的含量；3) Western blot检测氧化应激状态下UA刺激HUVECs后p38MAPK蛋白的表达情况。结果：1)CCK-8结果测定显示：UA(8、10mg/dl)组HUVECs活力较对照组(0 mg/d1)有显著降低(P0.05); H202+UA (6、8、10mg/dl)组与对照组(H202+UA 0mg/dl)比较,差异有统计学意义(P0.05)。2)MDA含量结果测定显示：UA (8、10mg/dl)组HUVECs MDA含量较对照组(0 mg/dl)有显著增高(P0.05); H2O2+UA (6、8、10mg/dl)组与对照组(H2O2+UA 0mg/dl)比较,差异有统计学意义(P0.05)。3)SOD含量测定结果显示：UA (8、10mg/dl)组HUVECs SOD含量较对照组(0 mg/d1)有显著降低(P0.05); H202+UA (6、8、10mg/dl)组与对照组(H2O2+UA Omg/dl)比较,差异有统计学意义(P0.05),4)Western blot测定结果显示：1)不同浓度的UA (0、4、6、8、1mg/dl)刺激HUVECs后磷酸化p38MAPK (phosphorylation-p38MAPK p-p38MAPK)和p38MAPK蛋白表达虽随着UA浓度的升高而增强,但均不明显；与对照组Om/dl UA组相比,p值均0.05,差异无统计学意义；2)氧化应激状态下不同浓度的UA随着UA浓度的升高,p-p38MAPK蛋白表达逐渐增强,且与对照组Omg/dl UA组比较,6mg/dl、8mg/dl、10mg/dl UA组p值均0.05,具有统计学意义,而p38MAPK蛋白表达变化均不明显,p值均0.05,无统计学意义；3)加入p38MAPK特异性抑制剂SB203580后,氧化应激状态下的不同浓度UA组p-p38MAPK及p38MAPK蛋白表达均未有明显变化(p0.05)；4)与对照组(8mg/dl UA组)相比,H202组及H202+UA+SB203580组p-p38MAPK和p38MAPK的蛋白表达p值均0.05,均无统计学意义；而H2O2+UA组p-p38MAPK蛋白表达p值0.05,有显著性差异。结论：1)尿酸浓度达8mg/dl后,体外刺激24h就可损伤HUVECs,提示轻度的尿酸升高也会对HUVECs的功能造成一定的影响；2)H202刺激后UA浓度达6mg/dl时,就会引起细胞的损伤,提示氧化应激状态下UA (6mg/dl)生理浓度下也会引起人血管内皮细胞的损伤；3)尿酸对HUVECs的损伤会引起p38MAPK蛋白表达增强,提示氧化应激状态下尿酸升高对HUVECs的损伤可能部分与p38MAPK信号通路有关。
【关键词】：尿酸 脐静脉内皮细胞 氧化应激 p38MAPK
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R589.7
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 英文缩略词表11-13
• 第一部分 不同浓度尿酸在氧化应激状态下对HUVECs损伤机制研究13-38
• 前言13-14
• 实验材料与方法14-23
• 结果23-28
• 讨论28-34
• 结论34-35
• 参考文献35-38
• 第二部分 p38MAPK通路与氧化应激状态下尿酸对HUVECs损伤之间的关系38-55
• 前言38-39
• 实验材料与方法39-45
• 结果45-49
• 讨论49-52
• 结论52-53
• 参考文献53-55
• 论文综述55-65
• 参考文献61-65
• 攻读硕士学位期间发表文章目录65-66
• 致谢66

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  本文关键词：尿酸在氧化应激状态下对血管内皮细胞损伤机制的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：270914