环指蛋白10对高糖诱导下血管平滑肌细胞功能的影响

发布时间：2020-06-08 22:33

【摘要】：目的:探讨RNF10对高糖诱导下血管平滑肌细胞功能的作用机制。方法:模拟代谢综合征血管再狭窄的模型,体外采用高糖(4.5g/L)培养基诱导血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)过度增殖及细胞外基质沉积的病理状态。根据不同培养基及腺病毒转染情况,共分为4组:空白对照组(Control group);高糖组(High Glucose,HG group);高糖+病毒空载体组(HG+Ad-GFP group);高糖+过表达RNF10组(HG+Ad-RNF10 group)。荧光显微镜下定性分析VSMCs腺病毒转染效果;CCK-8和EdU检测VSMCs的增殖率;流式细胞仪检测VSMCs的周期分布;Western blot定量分析VSMCs的RNF10、CyclinD1和CDK4的蛋白表达;qPCR定量分析VSMCs的MMP-2和TIMP-2 mRNA的表达。结果:(1)RNF10显著抑制高糖诱导下VSMCs的增殖率(P0.05);(2)RNF10显著抑制高糖诱导下VSMCs的周期从G_0-G_1期到S期的转化(P0.05);(3)RNF10显著抑制高糖诱导下VSMCs的周期蛋白CyclinD1和CDK4的表达(P0.05);(4)RNF10显著促进MMP-2和TIMP-2的转录水平(均P0.05),且促进TIMP-2 mRNA更为明显,最终导致显著降低MMP-2/TIMP-2(P0.05)。结论:RNF10可明显改善高糖诱导下VSMCs的功能,其机制可能与抑制VSMCs增殖反应和细胞外基质沉积有关。
【图文】：

图 1：病毒转染效率检测Figure 1: Measurements of adenovirus transfection efficiency；A：Fluorescence microscopy oftransfection efficiency ofAd-GFP and Ad-RNF10 in VSMCs；B：Quantification of RNF10protein expressions of VSMCs by western blot；# P<0.05 vs. HG+Ad-GFP.2.2 RNF10 显著抑制高糖诱导下 VSMCs 的过度增殖采用 CCK8 试剂盒评估 RNF10 对高糖诱导下 VSMCs 增殖率的影响。结果显示，与空白对照组相比，高糖组和高糖+病毒空载体组的细胞增殖率显著上升（P<0.05），进一步提示高糖可明显促进 VSMCs 的增殖反应；与高糖+病毒空载体组相比，，高糖+过表达 RNF10 组的细胞增殖率显著下降（P<0.05），进一步提示 RNF10 明显抑制高糖诱导下 VSMCs 的过度增殖。除此之外，也采用 EdU 试剂盒双重验证 RNF10 对高糖诱导下 VSMCs 增殖率的影响。结果显示, 与空白对照组相比，高糖组和高糖+病毒空载体组的细胞增殖率显著上升（P<0.05），提示高糖

图 2：检测 RNF10 对高糖诱导下 VSMCs 增殖率的影响Figure 2: assessments of RNF10 on the proliferation of VSMCs exposed to high glucose;A：CCK8 assays; B:fluorescence microscopy of EdU assay; Red staining demonstrated cellundergoing proliferation; nuclei were stained by DAPI (blue); C: Quantification of EdUpositive index shown as a percentage (positive cell number); * P<0.05 vs. Control group;# P<0.05 vs. HG+Ad-GFP group.2.3 RNF10 显著阻滞高糖诱导下 VSMCs 的周期从 G0-G1 期向 S 期的转化采用流式细胞术检测 RNF10 对高糖诱导下 VSMCs 的周期分布的影响。结果显示, 与空白对照组相比，高糖组和高糖+病毒空载体组中处于 G0-G1期的 VSMC数量显著下降，同时处于 S 期的 VSMCs 数量显著上升（均 P<0.001），进一步提示高糖可显著诱导 VSMCs 的细胞周期由 G0-G1期向 S 期过渡，进而促进 VSMC
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R589

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本文编号：2703746