经导管胃左动脉栓塞术对肥胖伴2型糖尿病的实验研究

发布时间：2020-06-12 19:09

【摘要】：目的:观察经导管胃左动脉栓塞术对肥胖伴2型糖尿病(T2DM)比格犬模型的体重、瘦素(leptin)、饥饿激素(ghrelin)蛋白表达水平及相关生化指标的影响。确定胃左动脉栓塞对Beagle犬模型内分泌因素的影响。方法:本研究以随机对照设计原则,比格犬为研究对象的观察对比实验。1)2型糖尿病模型建立:健康成年雄性比格犬9只,随机分两组分别是处理组和对照组,处理组采用特殊的高脂高糖饮食喂养4周,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)柠檬酸钠溶液25 mg/kg,后继续给予高热量饮食喂养至10周,对照组给予普通进食,2型糖尿病模型造模成功后,实验组采用完全随机方法分栓塞组和非栓塞组,各亚组实验所需Beagle犬3只:A组:2型糖尿病栓塞组,行经导管胃左动脉聚乙烯醇药物颗粒(PVA)栓塞组;B组:2型糖尿病未栓塞组,经导管胃左动脉生理盐水12ml灌注;C组:对照组经导管胃左动脉生理盐水12ml灌注。手术后10周后处死动物,提取血清用Elisa方法检测瘦素、饥饿激素、胰岛素浓度表达水平,同时每周测量动物体重,测量血糖及相关生化指标,并进行统计分析。2)单纯性肥胖模型建立:健康成年雄性比格犬9只,随机分两组分别是实验组和对照组,实验组给予专用的高能量饲料,对照组给予普通常规饲料,肥胖模型造模成功后,实验组以是否栓塞为据分栓塞组和非栓塞组,各亚组实验所需Beagle犬3只:A组:肥胖栓塞组,聚乙烯醇颗粒(PVA)经导管胃左动脉栓塞组;B组:肥胖未栓塞组,经导管胃左动脉生理盐水12ml灌注;C组:对照组,经导管胃左动脉生理盐水12ml灌注。手术后10周处死实验动物,提取胃组织蛋白质,用western blot方法检测瘦素,饥饿激素蛋白表达水平,同时术后每两周测量动物体重,饮食量及相关生化指标,最后进行统计分析。结果:1)Elisa方法检测结果显示,肥胖伴T2DM栓塞组(5.35±0.094)与未栓塞组(11.24±0.16)比Ghrelin表达量降低,具有显著性差异(P0.05),栓塞组与正常对照组(7.705±0.09)比ghrelin表达量降低,具有显著性差异(P0.05),术后Ghrelin的浓度降低。2)肥胖伴T2DM栓塞组(7.43±0.11)比未栓塞组Leptin表达量(15.40±0.07)具有显著性差异(P0.05),栓塞组与正常对照组(9.38±0.11)Leptin具有显著性差异(P0.05)。肥胖伴T2DM栓塞组(19.55±0.2274)比未栓塞组表达量(17.72±0.1298)血清胰岛素浓度有统计学差异(P0.05),实验组栓塞组与正常对照组(20.89±0.1144)有统计学差异(P0.05),术后胰岛素浓度升高。肥胖伴T2DM栓塞组(12.57±0.25)比未栓塞组表胰岛素抵抗表达量(7.260±0.13)有统计学差异(P0.05),实验组栓塞组与正常对照组(5.015±0.17)有统计学差异(P0.05),术后胰岛素抵抗改善。2)Western-blotting结果显示:单纯性肥胖栓塞组(0.7846±0.4184)比未栓塞组Ghrelin表达量(2.31±0.26)具有显著性差异(P0.05),处理组栓塞组与正常对照组(1.07±0.30)具有显著性差异(P0.05),术后Ghrelin的蛋白表达明显降低。单纯性肥胖栓塞组(0.66±0.14)比未栓塞组Leptin蛋白表达量(2.15±0.24)有统计学差异(P0.05),与正常对照组(1.20±0.07)有统计学差异(P0.05),术后Leptin的蛋白表达水平明显降低。结论:胃左动脉栓塞术可以有效地抑制组织Leptin,Ghrelin蛋白表达水平,并引起体重的降低;经导管胃左动脉栓塞术对肥胖、肥胖伴2型糖尿病Leptin,Ghrelin浓度有明显的降低作用;经导管胃左动脉栓塞术对肥胖伴2型糖尿病比格犬的血糖的降低、改善胰岛素抵抗及胰岛素水平升高起一定的积极作用。
【图文】：

造影:A 组-2 型糖尿病栓塞实验组:经导管聚乙烯塞完成金标准:胃底部染色区域可见 PVA 在血管组:经导管 0.9%生理盐水 6ml 胃左动脉灌注。管，0.9%生理盐水 6ml 胃左动脉灌注。实验动管，各肌肉缝合，，逐渐缝合皮肤。术中预防术后予 40 万单位青霉素静脉滴注，术后给予 2000m观察生命特征及术区恢复情况，术后 10 天拆线选择性造影 图 2 胃左动脉 LGA Fig 2 LGA

图 4 ghrelin elisa 标准曲线配置方法Fig. 4 ghrelin elisa stander curve清 leptin 浓度检测* wash buffer 加入 450ml ddH2O 配置成 1*wash buffer。加入 80ul 标准品（图 5），样品,混匀。空加入 20ul assay buffer,混匀。 20ul canine leptin,混匀，再加入 20ul QC1 和 20ul QC2,混匀。-500 prm 转速室温摇匀 2 个小时。加入 300ul wash buffer 先 3 次，每次 3 分钟。 100ul 标记抗体，室温放置 1 小时。加入 300ul wash buffer 先 3 次，每次 3 分钟。 100ul 酶标记物，室温放置 30 分钟。 600ul wash bufffer 洗 6 次每次 5 分钟。 100ul 终止液。光光度计测量 OD 370nm 时的分光光度值。
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R587.1

【参考文献】

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本文编号：2709972