IRF-1在系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞中的表达及意义

发布时间：2020-07-24 01:12

【摘要】：目的:通过观察干扰素调节因子-1(IRF-1)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞中的表达,及其与疾病活动性、临床特征、实验室检查及Th1型细胞因子白介素(IL)-12相关性,探讨其在SLE发生发展中的可能作用。方法:(1)收集广西医科大学第一附属医院风湿免疫科2017年7月至2017年10月间病房及门诊SLE的活动期初治患者25人,并同期选取年龄性别匹配的健康对照25人,采集抗凝外周静脉血,分离单个核细胞(PBMC),Real-timePCR法检测患者组及对照组IRF-1mRNA表达水平,收集患者临床资料,对IRF-1的表达与临床指标的相关性进行分析;(2)选取2017年11月至2018年4月间病房及门诊SLE的活动期初治患者及健康对照者分别为35人和25人,分离PBMC,免疫磁珠法分选CD4~+T细胞,RT-PCR法检测各组IRF-1mRNA表达水平,收集患者临床资料,对IRF-1的表达与临床指标的相关性进行分析;(3)ELISA法检测39例患者(PBMC组16例,CD4~+T细胞组23例)及22例健康对照者外周血血浆中Th1型细胞因子IL-12表达,Pearson相关分析其与临床指标的相关性,并进行分析IL-12与PBMC及CD4~+T细胞中IRF-1mRNA表达的相关性;(4)选取2018年4月至2018年5月SLE的活动期初治患者及健康对照者分别10人和8人,分离PBMC,免疫磁珠法分选CD8~+T细胞,RT-PCR法检测患者组及对照组IRF-1表达水平,并分析其与临床指标的相关性。结果:(1)SLE患者PBMC中IRF-1mRNA表达较正常对照组均显著下降(P0.01),与疾病活动性,抗dsDNA滴度、补体、免疫球蛋白等实验室指标无相关性(P0.05),在有和无口腔溃疡、光过敏、关节炎等临床表现中差异无统计学意义(P0.05);(2)SLE患者外周血CD4~+T细胞中IRF-1mRNA表达较正常对照组下降(P0.05),与疾病活动性及实验室指标无相关性(P0.05),在有和无的一些常见临床表现中差异无统计学意义(P0.05);(3)外周血血浆中Th1型细胞因子IL-12p70表达水平下降(P0.05),与病情活动显著正相关(r=0.421,P=0.008),与补体C4显著负相关C4(r=-0.439,P=0.007);(4)血浆中IL-12p70表达水平与CD4~+T细胞中IRF-1mRNA表达显著正相关(r=0.644,P=0.001),而与PBMC中IRF-1 mRNA表达无相关性(r=0.46,P=0.07);(5)外周血CD8~+T中IRF-1mRNA表达较正常对照组均显著下降(P0.01),并与CD8~+T数量正相关(r=0.75,P=0.02),与余实验室指标及疾病活动性无相关性(P0.05),在有和无的一些常见临床表现中差异无统计学意义(P0.05)。结论:(1)初治SLE患者PBMC、外周血CD4~+T及CD8~+T细胞中,IRF-1mRNA表达降低,CD8~+T细胞中IRF-1mRNA表达与CD8~+T数量显著正相关。(2)SLE患者外周血血浆中Th1型细胞因子IL-12表达水平下降,与病情活动正相关,与补体C4负相关,并与CD4~+T细胞中IRF-1mRNA表达呈显著正相关。(3)IRF-1可能参与SLE免疫反应,与CD4~+T及CD8~+T细胞和IL-12相关。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R593.241
【图文】：

9）留在原管内的阳选细胞可用适当的缓冲液(无菌 PBS+3-10%热灭活进口胎牛血清)或培养基重悬以备后续应用，包括流式细胞学检测。10）流式细胞分析细胞纯度(图 1-1)，如果纯度未能达到 90％以上，将应用以上提到的技术再次纯化。11）将重悬细胞转移至 1.5mlRNase free EP 管内，300g 5min 离心后，倒掉上清；12）1ml PBS 重悬沉淀，300g 5min 离心，倒掉上清；13）加入 1mL Trizol，适当的振荡和吹打至细胞完全裂解为均 溶液管中,充分混匀,室温静置 10min，后放至-80℃冰箱中保存备用。

27图 2-1 目的基因 IRF-1 与内参基因 GAPDH 的基因扩增及熔解曲线Fig2-1 Gene amplification curve and melting curve of target gene IRF-1 and reference GAPDH

者外周血 CD8+T 细胞中 IRF-1mRNA 表达与 CD8+T 细胞计数相关性orrelation between mRNA expression of IRF-1 in enriched CD8+T cells an因子 IL-12p70 在患者及健康对照组外周血血浆组与健康对照组血浆中 IL-12p70 表达水平比较检测患者及 HC 外周血血浆中 IL-12p70 的表达，结果L-12p70 水平低于正常对照组（p=0.03）。详见表 4- IL-12p70 细胞因子浓度 SLE（n，mean±SD） HC（n，mean±SD） 0(pg/ml) 39，0.98±2.9 22，1.15±0.25

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本文编号：2768093