MUC1下调减弱糖皮质激素在人支气管上皮细胞中的抗坏死性凋亡作用

发布时间：2020-08-21 13:11

【摘要】：研究背景:激素抵抗型哮喘严重影响患者生活质量和增加患者经济负担,寻找有效地治疗是亟待解决的关键性问题。哮喘激素抵抗的机制之一是过度激活的炎症因子导致的气道上皮细胞坏死性凋亡。粘蛋白1(MUC1),广泛表达于气道上皮细胞,具有抑制炎症和细胞死亡的作用。研究发现重症哮喘中,MUC1缺失显著抑制地塞米松(Dex)的抗炎作用。然而,MUC1与Dex介导的抗坏死性凋亡之间的作用与机制目前尚未有研究。目的:探究MUC1下调是否减弱Dex对气道上皮细胞的抗坏死性凋亡作用,并阐释其潜在机制。方法:将MUC1小干扰RNA(siRNA)转染人支气管上皮细胞(16HBE),然后用肿瘤坏死因子(TNF-α)、Dex刺激。流式细胞仪分析细胞的坏死性凋亡情况,免疫印迹检测MUC1、糖皮质激素受体(GR)α、GRβ、核因子-κB(NF-κB p65)、磷酸化核因子-κB(p-p65)和组蛋白脱乙酰酶-2(HDAC2)的蛋白表达。另外,通过免疫荧光分析MUC1和GRα的核转位。结果:TNF-α能诱导16HBE细胞发生坏死性凋亡;MUC1下调加重TNF-α诱导的16HBE细胞发生坏死性凋亡,然而其效应不能被Dex抑制;另外,我们发现MUC1下调抑制GRα核转运,并且能减弱Dex对p-p65的抑制作用。结论:MUC1下调促进TNF-α诱导16HBE细胞发生坏死性凋亡,Dex不能抑制其加重的细胞坏死性凋亡。此外,在TNF-α诱导坏死性凋亡中,MUC1可通过抑制GRα核转运和减弱Dex对p-p65的抑制作用致激素抵抗形成。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R562.25
【图文】：

蛋白质免疫印迹,转染,小干扰,地塞米松

26图 3：激素抵抗与 GRα和 GRβ蛋白表达无关。将小干扰 RNA（MUC1-siRNA 和阴性对照 scrambled siRNA）转染至 16HBE 细胞，然后用 TNF-α（300 ng/mL）处理 24 小时。（A，B）实时荧光定量 PCR 和蛋白质免疫印迹检测 GRα表达。（C，D）实时荧光定量 PCR 和蛋白质免疫印迹检测 GRβ表达。数据以均值 ± 标准差显示（n=3），并用 ANOVA 进行统计学分析，*P < 0.05。NC组（转染阴性对照 scrambled siRNA）；MUC1-siRNA 组（转染 MUC1-siRNA）。抑制。另外，TNF-α能减弱地塞米松对 GRα核转位的正调控作用，然而这种趋势未能在 MUC1 下调的 16HBE 细胞中显现（图 4A）。为进一步证实 MUC1 下调能抑制 GRα核转位，我们分别检测胞质和胞核中 GRα的表达。Western blot 结果显示，与 MUC1-siRNA 组相比，

核蛋白,胞核,亚细胞定位,共聚焦显微镜

华中科技大学硕士学位论文Dex 增加了阴性对照组中 GRα核蛋白表达。而与 NC + Dex 组相比，MUC1-siRNA+ Dex 组中 GRα核蛋白表达减少。另外，我们通过共聚焦显微镜探究 MUC1 和 GRα的亚细胞定位。如图 4C 所示，在基础条件下，MUC1 和 GRα定位于 16HBE 细胞的胞质和胞核中，而在 Dex 处理后，胞核中 MUC1 与 GRα共表达增加。总之，这些数据提示 MUC1 下调能抑制GRα核转位来降低 GC 敏感性（图 6）。

信号通路,转染,荧光分析,地塞米松

华中科技大学硕士学位论文荧光分析 GRα的分布。（B）Western blot 检测胞质和胞核中 GRα的表达。（C）1 μMDex 处理 16HBE 细胞 12 小时后，免疫荧光分析 MUC1 和 GRα的分布。数据以均值 ±标准差显示（n=3），并用 ANOVA 进行统计学分析，*P < 0.05；**P < 0.01。Scale bar= 50 μm。Dex（地塞米松）；NC 组（转染阴性对照 scrambled siRNA）；MUC1-siRNA组（转染 MUC1-siRNA）。5.MUC1 下调通过抑制 p-p65 表达减弱糖皮质激素敏感性目前，广泛接受NF-κB p65和HDAC2信号通路参与激素抵抗的形成，为此，我们继续探究 MUC1 下调是否会激活以上两种信号通路。我们发

【相似文献】