谷氨酸对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞分泌细胞因子的影响

发布时间：2020-09-15 17:18

　　目的谷氨酸(glutamate,Glu)信号在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发生发展中可能起重要作用。本研究旨在分析不同浓度Glu对体外培养的RA滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)分泌白介素-17(IL-17)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探讨Glu在RA的发生发展过程中的作用。方法本研究采用RA患者关节术后滑膜标本,培养原代细胞,采用3-5代RA-FLS,选取光镜下观察生长状态良好的FLS进行实验。实验按Glu不同的浓度共分4组,包括A组(空白组)、B组(100umol/L Glu)、C组(500umol/L Glu)、D组(1000umol/L Glu),刺激RA-FLS 15小时后,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中IL-17及TNF-α的分泌变化情况。实验共重复三次。结果用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。结果(1)RA-FLS在无任何刺激下自身可分泌一定量的IL-17及TNF-α;(2)Glu对RA-FLS分泌IL-17结果示:A-B组、A-D组、B-D组、C-D组组间比较差异均有统计学意义(P0.05,P0.01,P0.01,P0.01),其余组间对比差异无统计学意义。即当浓度在100umol/L时,Glu刺激RA-FLS分泌更多的IL-17,当浓度在1000umol/L时,Glu则抑制RA-FLS分泌IL-17;(3)Glu对RA-FLS分泌TNF-α结果示:A-D组组间比较差异均有统计学意义(P0.05),其余组间对比差异无统计学意义。即当Glu浓度在100umol/L及500umol/L时,Glu对RA-FLS TNF-α的分泌与无Glu刺激时的TNF-α分泌影响没有统计学差异,当浓度在1000umol/L时,Glu则抑制RA-FLS分泌TNF-α。结论Glu能通过不同的浓度调控RA-FLS对于IL-17及TNF-α的分泌,低浓度的Glu对RA-FLS分泌IL-17起刺激作用,高浓度的Glu对RA-FLS分泌IL-17及TNF-α起抑制作用。
【学位单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R593.22
【部分图文】：

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RA滑膜中Glu信号作用模式图

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兰州大学硕士研究生学位论文谷氨酸对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞分泌细胞因子的影响第三章结果3.1 RA-FLS 的形态处理后的组织在37°C、5%CO2培养箱中过夜后，倒置显微镜下可见部分FLS从组织边缘爬出，多为梭形，细胞核位于细胞中央，生长状态呈旋涡状，偶可见有伪足的巨噬细胞，7-10天细胞可融合至80%-90%，培养传代至第三代时细胞状态相对稳定。3.2 RA-FLS 免疫荧光鉴定荧光显微镜下，滑膜成纤维细胞胞浆被Vimentin染成绿色，DAPI染料染核呈蓝色，软件合并后可见RA-FLS核位于细胞中间，细胞纯度达大于99%（图2）。

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学硕士研究生学位论文谷氨酸对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞分泌细胞因lu 浓度为 500umol/L 时，其刺激 RA-FLS 表达的 IL-17 较空白组及无统计学意义，而当 Glu 浓度上升至 1000umol/L 时，其刺激 RA-17 不仅没有增加，反而较空白组、100umol/L 及 500umol/L 时减计学意义，提示在高浓度 1000umol/L 时，Glu 时抑制 RA-FLS 表表 1、图 3）。表 1 不同浓度 Glu 对 RA-FLS 表达 IL-17 的影响IL-17 浓度（pg/ml）第一次第二次第（空白组） 4.29 3.79 （100um/L） 5.19 4.62 （500um/L） 4.56 4.155 （1000um/L） 0.65 0.945

【参考文献】