Ghrelin对胰岛α细胞分泌胰高血糖素的影响及SIRT1在其中的作用

发布时间：2020-09-21 18:46

　　 研究背景及目的:糖尿病的特征是空腹血糖水平慢性增加及餐后血糖水平显著且持续性升高。我们已知胰岛素分泌不足及胰岛素抵抗是糖尿病的两大发病机制,而胰岛素和胰高血糖素是参与调节葡萄糖稳态的两种主要的胰腺激素,目前普遍认为胰岛α细胞分泌胰高血糖素对糖尿病的发病起着不可忽视的作用。促摄食激素Ghrelin是生长激素促泌素受体(GHSR)的内源性配体。Ghrelin与其受体GHSR结合,从而发挥其促进摄食、生长激素释放、胃肠动力、调节心血管功能及能量平衡等作用。多项研究证实ghrelin可以导致人体血糖升高,且可通过调节胰岛β细胞功能发挥其抑制胰岛素分泌的作用。目前仅一篇文献认为ghrelin可直接促进胰岛α细胞分泌胰高血糖素,并引入ghrelin-胰高血糖素轴作为在禁食条件下控制血糖的重要机制。本实验为明确ghrelin对胰高血糖素分泌的影响,将临床实验与动物实验相结合,并且使用存在于哺乳动物多种细胞内的沉默信息调节因子1(SIRT1)的抑制剂EX527进行干预,判断SIRT1是否存在于ghrelin影响胰高血糖素分泌的作用通路中。该实验结果为寻求新的糖尿病治疗方法奠定了理论基础。实验方法:一、2型糖尿病患者血清胰高血糖素的检测及临床意义选取2019年1月至2019年3月扬州大学附属医院收治的2型糖尿病患者20例,并收集同期于我院健康体检中心体检的健康人20例作为对照组。所有受试者均排除感染、应激、严重心脑血管疾病及糖尿病急性并发症,严重的胃肠道疾病或有胃肠道手术病史,肝肾功能障碍、血清胰岛素相关抗体阳性及其他可能与糖代谢相关的代谢性疾病。所有受试者均空腹12小时,次日清晨抽取空腹静脉血测定血清葡萄糖、ghrelin浓度、胰高血糖素及胰岛素值。同时测量受试者身高、体重,并记录性别、年龄。数据采用SPSS 19.0统计学软件进行分析。二、Ghrelin对小鼠胰高血糖分泌的作用研究选择6周龄的C57BL/6J雄性健康小鼠50只,体重18-24g,随机平均分为5组,分别为生理盐水对照组(NS组)、DMSO溶剂对照组(DMSO组)、低浓度ghrelin实验组(LG组)、高浓度ghrelin实验组(HG组)、高浓度ghrelin+EX527实验组(HG+E)组,每组10只。保持12h昼/夜节律,适应性喂养1周。实验日前各组均予12h禁食处理。实验日对照组分别腹腔注射生理盐水、DMSO溶剂,实验组分别腹腔注射ghrelin0.2ug/g、ghrelin0.5ug/g、ghrelin0.5ug/g+EX52710ug/g。注射药物1小时后进行小鼠眼眶后静脉丛采血,得到血清后于-20摄氏度冷冻保存。采用One-Touch Ultra稳豪倍优型血糖仪监测各组小鼠空腹血糖及注射ghrelin 1h后的血糖水平。采用Mouse Insulin/Glucagon Elisa测定试剂盒检测血清胰岛素、胰高血糖素水平,并做胰腺HE染色观察不同实验组的形态学改变。所有数据采用SPSS 19.0统计学软件进行分析。结果一、2型糖尿病组、健康对照组两组受试者一般情况两组受试者性别、年龄、体重指数均无明显统计学差异。二、2型糖尿病组、健康对照组两组受试者空腹血清葡萄糖水平、胰高血糖素浓度、胰岛素浓度及ghrelin浓度2型糖尿病组空腹血糖明显高于健康对照组(P0.01);2型糖尿病组胰岛素浓度高于健康对照组(P0.05);2型糖尿病组胰高血糖浓度高于健康对照组,但未见明显统计学差异;2型糖尿病组ghrelin浓度明显高于健康对照组(P0.01)。三、C57BL/6J小鼠体重、空腹血糖水平、腹腔注射药物1h后血清葡萄糖水平及胰高血糖素、胰岛素浓度各组小鼠体重、空腹血糖水平均无明显统计学差异;各组小鼠腹腔注射ghrelin 1h后血清葡萄糖水平结果:HG、LG组均明显高于对照的NS 组(P0.01)、DMSO 组(P0.01);HG 组高于 LG 组(P0.05);HG+E 组高于 NS 组(P0.05)、DMSO 组(P0.05);HG 组高于 HG+E 组(P0.01);LG 组与 HG+E 组之间对比无明显统计学差异;NS组、DMSO组对比无明显统计学差异;各组小鼠腹腔注射ghrelin 1h后血清胰高血糖素浓度结果:HG、LG组均明显高于对照的 NS 组(P0.01)、DMSO 组(P0.01);HG 组高于 LG 组(P0.01);HG+E 组高于NS 组(P0.05)、DMSO 组(P0.05);HG 组高于 HG+E 组(P0.01);LG 组与 HG+E组之间对比无明显统计学差异;NS组、DMSO组对比无明显统计学差异;各组小鼠腹腔注射ghrelin 1h后血清胰岛素浓度结果均无明显统计学差异。四、C57BL/6J小鼠腹腔注射药物1h后胰腺组织病理学检查对比结果各组小鼠胰腺组织HE染色结果对比,胰岛细胞数量、密度及形态均无明显差异。结论Ghrelin可促进胰岛α细胞分泌胰高血糖素,且SIRT1可能存在于ghrelin促进胰高血糖素分泌的作用通路中。
【学位单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R587.1
【部分图文】：

２８逦扬州大学硕士学位论文逦逡逑四、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠腹腔注射药物ｌｈ后胰腺组织病理学检查逡逑各组小鼠随机选取２只做胰腺Ｈ＆Ｅ染色对比，胰岛数量、密度，胰岛细胞大小及形逡逑态均无明显差异（图１－２、图１－３、图１－４、图１－５、图卜６）。逡逑

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本文编号：2823856