整合素连接激酶在早期糖尿病肾病足细胞转分化中的作用及大黄素对其的干预
发布时间：2020-10-14 16:31
目的 1.体内外实验观察高糖环境下,足细胞极性标志物desmin、nephrin的表达变化,探讨高糖对足细胞转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的影响;2.体内外实验观察足细胞转分化过程中整合素连接激酶(integrin linked kinase,ILK)的表达变化,ILK阻断后足细胞EMT的抑制情况,探讨ILK在足细胞EMT中的作用;3.观察中药单体大黄素对高糖诱导的足细胞EMT及ILK表达变化的影响,探讨大黄素治疗糖尿病肾病的机制。方法细胞试验:将条件性永生的小鼠足细胞随机分为高糖组(HG)、正常对照组(NG)、HG+大黄素组30ug/ml,高糖刺激+ILK阻断组(QLT0267)(1umol/l)干预组。采用免疫荧光、Western blot、real time RT-PCR检测ILK、nephrin和desmin的表达变化,各项指标间作相关分析。动物试验:雄性健康SD大鼠,STZ造模成功后随机分为下列几组:①DM组:予等量生理盐水灌胃;②DM+大黄素组:予灌胃大黄素20 mg·kg-1·d-1;③DM+ILK阻断组:腹腔注射QLT0267剂量10mg·kg-1·w-1;④正常对照组:每日给予等量生理盐水。用药12周取肾组织,免疫组化、Western blot及real time RT-PCR等方法检测大足细胞转分化标志物nephrin、desmin及ILK的表达变化,与大鼠生化指标及尿ACR做相关分析。结果 1.和正常糖组比较,高糖组足细胞desmin表达增加,nephrin表达减少,高糖组足细胞发生EMT;和正常对照组比较,DM组肾脏足细胞desmin表达增加,nephrin表达减少,DM鼠足细胞发生EMT,尿ACR增高。2.高糖诱导EMT过程中ILK表达增加,阻断ILK后高糖诱导EMT作用减弱;DM鼠肾脏足细胞ILK表达增加,ILK阻断后足细胞EMT减弱,尿ACR减低。3.大黄素可减轻高糖诱导的EMT,同时使ILK表达减少;大黄素可使DM鼠足细胞EMT减轻,同时ILK表达减少,尿ACR减低。结论 1.高糖可诱导足细胞发生转分化;糖尿病肾病大鼠足细胞发生转分化,尿蛋白增加。2.高糖通过调节ILK信号通路诱导足细胞转分化。3.大黄素通过阻断ILK信号通路抑制高糖诱导的足细胞转分化,减少蛋白尿。
【学位单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R587.2;R692.9
【部分图文】：
整合素连接激酶在早期糖尿病肾病足细胞转分化中的作用及大黄素对其的干预 结 果结 果4.1 足细胞极性标志物 desmin 的免疫荧光检查结果和正常对照组足细胞比较，30mmol/L 高糖环境下生长 72 小时，足细胞 desmin表达明显增高（P=0.041）；高糖环境下同时加入 30ug/ml 大黄素后 desmin 表达量较高糖组明显减少（P=0.033）；高糖环境下同时加入 QLT0267 阻断 ILK 信号通路后 desmin表达量较高糖组明显减少（P=0.025）。（见图 1）
果 整合素连接激酶在早期糖尿病肾病足细胞转分化中的作用及大黄素对其的激的同时加入 30ug/ml 大黄素培养 72 小时，nephrin 蛋白表达较高糖组增P=0.034），desmin、ILK 蛋白表达较高糖组减少（P=0.044,0.034），说明大黄素可制高糖诱导的足细胞转分化，抑制 ILK 的表达。在高糖刺激的同时加入 ILK 受体组（QLT0267）1umol/l 培养 72 小时，nephrin 蛋白表达较高糖组增加（P=0.038smin 蛋白表达较高糖组减少（P=0.034），ILK 受体阻断后本组 ILK 表达与高糖组异（P=0.18）（图 2）。相关分析显示 ILK 与 desmin 成正相关，与 nephrin 成负相此在蛋白水平证明高糖可以诱导足细胞转分化，同时伴有 ILK 表达增加，大黄以减弱高糖诱导的足细胞转分化，减少 ILK 的表达。阻断 ILK 可以减弱高糖诱足细胞转分化。大黄素通过阻断 ILK 信号通路抑制高糖诱导的 EMT。
real time RT-PCR 结果显示, 与正常对照组相比较，30mmol/L 的高糖刺激 72 小时足细胞 nephrin mRNA 表达明显下降（P=0.034），desmin、ILK mRNA 表达明显增多（P=0.041），说明高糖可以诱导足细胞 EMT，同时伴有 ILK 表达增加。在高糖刺激的同时加入30ug/ml大黄素培养72小时，nephrin mRNA表达较高糖组增加（P=0.038），desmin、ILK mRNA 表达较高糖组减少（P=0.020,0.031），说明大黄素可以抑制高糖诱导的足细胞转分化，抑制 ILK 的表达。在高糖刺激的同时加入 ILK 受体阻断组（QLT0267）1umol/l 培养 72 小时，nephrin mRNA 表达较高糖组增加（P=0.038），desminmRNA 表达较高糖组减少（P=0.022），ILK 受体阻断后本组 ILK 表达与高糖组无差异（P=0.235）（图 3）。相关分析显示 ILK 与 desmin 成正相关，与 nephrin 成负相关。由此在基因水平证明高糖可以诱导足细胞转分化，同时伴有 ILK 表达增加，大黄素可以减弱高糖诱导的足细胞转分化，抑制 ILK 的表达。阻断 ILK 可以减弱高糖诱导的足细胞转分化。大黄素通过阻断 ILK 信号通路抑制高糖诱导的 EMT。
【参考文献】
本文编号：2840910
【学位单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R587.2;R692.9
【部分图文】：
整合素连接激酶在早期糖尿病肾病足细胞转分化中的作用及大黄素对其的干预 结 果结 果4.1 足细胞极性标志物 desmin 的免疫荧光检查结果和正常对照组足细胞比较，30mmol/L 高糖环境下生长 72 小时，足细胞 desmin表达明显增高（P=0.041）；高糖环境下同时加入 30ug/ml 大黄素后 desmin 表达量较高糖组明显减少（P=0.033）；高糖环境下同时加入 QLT0267 阻断 ILK 信号通路后 desmin表达量较高糖组明显减少（P=0.025）。（见图 1）
果 整合素连接激酶在早期糖尿病肾病足细胞转分化中的作用及大黄素对其的激的同时加入 30ug/ml 大黄素培养 72 小时，nephrin 蛋白表达较高糖组增P=0.034），desmin、ILK 蛋白表达较高糖组减少（P=0.044,0.034），说明大黄素可制高糖诱导的足细胞转分化，抑制 ILK 的表达。在高糖刺激的同时加入 ILK 受体组（QLT0267）1umol/l 培养 72 小时，nephrin 蛋白表达较高糖组增加（P=0.038smin 蛋白表达较高糖组减少（P=0.034），ILK 受体阻断后本组 ILK 表达与高糖组异（P=0.18）（图 2）。相关分析显示 ILK 与 desmin 成正相关，与 nephrin 成负相此在蛋白水平证明高糖可以诱导足细胞转分化，同时伴有 ILK 表达增加，大黄以减弱高糖诱导的足细胞转分化，减少 ILK 的表达。阻断 ILK 可以减弱高糖诱足细胞转分化。大黄素通过阻断 ILK 信号通路抑制高糖诱导的 EMT。
real time RT-PCR 结果显示, 与正常对照组相比较，30mmol/L 的高糖刺激 72 小时足细胞 nephrin mRNA 表达明显下降（P=0.034），desmin、ILK mRNA 表达明显增多（P=0.041），说明高糖可以诱导足细胞 EMT，同时伴有 ILK 表达增加。在高糖刺激的同时加入30ug/ml大黄素培养72小时，nephrin mRNA表达较高糖组增加（P=0.038），desmin、ILK mRNA 表达较高糖组减少（P=0.020,0.031），说明大黄素可以抑制高糖诱导的足细胞转分化，抑制 ILK 的表达。在高糖刺激的同时加入 ILK 受体阻断组（QLT0267）1umol/l 培养 72 小时，nephrin mRNA 表达较高糖组增加（P=0.038），desminmRNA 表达较高糖组减少（P=0.022），ILK 受体阻断后本组 ILK 表达与高糖组无差异（P=0.235）（图 3）。相关分析显示 ILK 与 desmin 成正相关，与 nephrin 成负相关。由此在基因水平证明高糖可以诱导足细胞转分化，同时伴有 ILK 表达增加，大黄素可以减弱高糖诱导的足细胞转分化，抑制 ILK 的表达。阻断 ILK 可以减弱高糖诱导的足细胞转分化。大黄素通过阻断 ILK 信号通路抑制高糖诱导的 EMT。
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 陈廷芳;陈明;秦建华;王明勇;;转化生长因子β1/整合素连接激酶信号通路在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素对其的干预效应[J];中西医结合学报;2009年01期
本文编号：2840910
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