桥本氏甲状腺炎中异常表达的S100A9对甲状腺上皮细胞JAM-A的影响
发布时间：2020-10-17 16:14
研究目的:桥本氏甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)是由致病因素诱导机体产生自身免疫性反应,最终导致甲状腺滤泡结构破坏和甲状腺功能减退的自身免疫性甲状腺疾病。本研究旨在探索HT患者甲状腺组织中髓关联蛋白14(Myeloid-Related Protein14,S100A9)对甲状腺滤泡上皮细胞和维持细胞间紧密连接的联接粘附分子A(junctional adhesion molecule A,JAM-A)的影响,了解S100A9对HT致病中的作用,为临床提供新的治疗靶点。研究方法:1.获取健康体检者、单纯性甲状腺结节患者与HT患者的血清标本各14例。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)对上述血清中S100A9的含量情况测定。2.通过手术切除获取单纯性甲状腺结节组织标本与HT患者的甲状腺标本各7例。进行免疫组织化学分析,观察S100A9蛋白和JAM-A蛋白的分布及表达情况。3.将S100A9小干扰(si-S100A9-100、si-S100A9-267)序列及阴性对照(si-Con)序列、S100A9过表达质粒(pc DNA3.1 S100A9)及空载对照(pc DNA3.1)质粒转染甲状腺上皮细胞株Nthy-ori 3-1,48 h后用荧光定量PCR(q PCR)及蛋白印迹(Western blot,WB)的技术检测S100A9与JAM-A的表达。4.S100A9的过表达质粒及空载质粒成功转染入Nthy-ori 3-1 48 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化及数量,流式细胞术检测细胞凋亡。研究结果:1.与健康人或单纯性甲状腺结节对照相比,HT患者血清中S100A9浓度增高。2.HT患者甲状腺组织标本中的S100A9蛋白显著高于单纯性甲状腺结节对照组(P0.001);相反,JAM-A的表达低于对照组(P0.001)。3.同对照比较,si RNA-S100A9转染入甲状腺滤泡上皮细胞系Nthy-ori 3-1后,S100A9 m RNA水平明显下降(P0.01),JAM-A m RNA水平未见明显改变,而JAM-A蛋白水平升高;用pc DNA3.1 S100A9处理甲状腺滤泡上皮细胞系Nthy-ori 3-1,S100A9 m RNA水平显著升高(P0.01),JAM-A m RNA表达未见明显改变,而JAM-A蛋白水平下降。4.转染成功48h后,与对照组比较,Nthy-ori 3-1中S100A9过表达后细胞变圆并且数量明显减少(P0.01),流式结果显示细胞凋亡水平(早期凋亡+晚期凋亡)明显升高(P0.001)。结论:HT患者甲状腺组织中异常高表达的S100A9通过抑制JAM-A蛋白的表达,以及促进甲状腺上皮细胞的凋亡,对正常甲状腺滤泡结构产生不良影响,参与了桥本氏甲状腺炎的发生发展。
【学位单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R581.4
【部分图文】：
图.图物p鱿劝比6而
图 4.2.2 S100A9、JAM-A 在甲状腺组织内的表达Figure 4.2.2 S100A9，JAM-A expression in the thyroid tissues注：收集 7 例单纯性甲状腺结节患者以及 7 例 HT 患者甲状腺组织的切片，应用免疫组化方法对 S100A9、JAM-A 表达情况进行检测，（A）图中所示即各组的代表性结果（棕色代表阳性表达）。阳性表达采用 Image-Pro plus 6.0 进行定量分析, 数据用柱状图（B）表示，***P<0.001 vs 对照组.4.3 siRNA-S100A9促进甲状腺滤泡上皮细胞JAM-A的表达为进 步明确S100A9уJAM-A之间的关系，我们体外采用siRNA-S100A9（包括siRNA-S100A9 100、siRNA-S100A9 267）瞬时转染甲状腺滤泡т皮细胞Nthy-ori 3-1，48 h后抽提细胞RNA，定量PCR验证S100A9干扰效果后进 步检测了JAM-A的表达。如图所示（4.2 A-C），уcontrol组相比，siRNA-S100A9的干扰效果明显（约40%），此外，Nthy-ori 3-1细胞进行S100A9干扰之后，qPCR分
注：收集 7 例单纯性甲状腺结节患者以及 7 例 HT 患者甲状腺组织的切片，应用免疫组化方法对 S100A9、JAM-A 表达情况进行检测，（A）图中所示即各组的代表性结果（棕色代表阳性表达）。阳性表达采用 Image-Pro plus 6.0 进行定量分析, 数据用柱状图（B）表示，***P<0.001 vs 对照组.4.3 siRNA-S100A9促进甲状腺滤泡上皮细胞JAM-A的表达为进 步明确S100A9уJAM-A之间的关系，我们体外采用siRNA-S100A9（包括siRNA-S100A9 100、siRNA-S100A9 267）瞬时转染甲状腺滤泡т皮细胞Nthy-ori 3-1，48 h后抽提细胞RNA，定量PCR验证S100A9干扰效果后进 步检测了JAM-A的表达。如图所示（4.2 A-C），уcontrol组相比，siRNA-S100A9的干扰效果明显（约40%），此外，Nthy-ori 3-1细胞进行S100A9干扰之后，qPCR分析显示各组间JAM-A mRNA含量无明显统计学差异，而WB实验发现，相对于对照组，S100A9干扰组JAM-A蛋白表达明显增多，显示有统计学意义（P <0.01）。
【参考文献】
本文编号：2845022
【学位单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R581.4
【部分图文】：
图.图物p鱿劝比6而
图 4.2.2 S100A9、JAM-A 在甲状腺组织内的表达Figure 4.2.2 S100A9，JAM-A expression in the thyroid tissues注：收集 7 例单纯性甲状腺结节患者以及 7 例 HT 患者甲状腺组织的切片，应用免疫组化方法对 S100A9、JAM-A 表达情况进行检测，（A）图中所示即各组的代表性结果（棕色代表阳性表达）。阳性表达采用 Image-Pro plus 6.0 进行定量分析, 数据用柱状图（B）表示，***P<0.001 vs 对照组.4.3 siRNA-S100A9促进甲状腺滤泡上皮细胞JAM-A的表达为进 步明确S100A9уJAM-A之间的关系，我们体外采用siRNA-S100A9（包括siRNA-S100A9 100、siRNA-S100A9 267）瞬时转染甲状腺滤泡т皮细胞Nthy-ori 3-1，48 h后抽提细胞RNA，定量PCR验证S100A9干扰效果后进 步检测了JAM-A的表达。如图所示（4.2 A-C），уcontrol组相比，siRNA-S100A9的干扰效果明显（约40%），此外，Nthy-ori 3-1细胞进行S100A9干扰之后，qPCR分
注：收集 7 例单纯性甲状腺结节患者以及 7 例 HT 患者甲状腺组织的切片，应用免疫组化方法对 S100A9、JAM-A 表达情况进行检测，（A）图中所示即各组的代表性结果（棕色代表阳性表达）。阳性表达采用 Image-Pro plus 6.0 进行定量分析, 数据用柱状图（B）表示，***P<0.001 vs 对照组.4.3 siRNA-S100A9促进甲状腺滤泡上皮细胞JAM-A的表达为进 步明确S100A9уJAM-A之间的关系，我们体外采用siRNA-S100A9（包括siRNA-S100A9 100、siRNA-S100A9 267）瞬时转染甲状腺滤泡т皮细胞Nthy-ori 3-1，48 h后抽提细胞RNA，定量PCR验证S100A9干扰效果后进 步检测了JAM-A的表达。如图所示（4.2 A-C），уcontrol组相比，siRNA-S100A9的干扰效果明显（约40%），此外，Nthy-ori 3-1细胞进行S100A9干扰之后，qPCR分析显示各组间JAM-A mRNA含量无明显统计学差异，而WB实验发现，相对于对照组，S100A9干扰组JAM-A蛋白表达明显增多，显示有统计学意义（P <0.01）。
【参考文献】
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本文编号：2845022
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