诱导型一氧化氮合酶联系肥胖诱导的炎症和胰岛素抵抗

发布时间：2020-11-08 20:23

　　 目的:肥胖是2型糖尿病的重要诱因,促进2型糖尿病的发生发展,并诱发胰岛素靶组织的慢性低度炎症,但胰岛素抵抗和炎症发生发展的机制未完全阐明。诱导型一氧化氮合酶iNOS与多种疾病有关,本研究用高脂饲料诱发野生型(WT)小鼠和iNOS~(-/-)小鼠胰岛素抵抗,探讨iNOS对胰岛素抵抗的影响。方法:第一部分:用普通饲料和高脂饲料分别喂养WT小鼠12周后,Real-time PCR检测胰岛素靶组织骨骼肌、肝脏、附睾脂肪的iNOS mRNA水平。第二部分:用普通饲料和高脂饲料分别喂养WT小鼠和iNOS~(-/-)小鼠,分为普通饮食(Chow)野生型(WT)小鼠组、普通饮食(Chow)iNOS~(-/-)小鼠组、高脂饮食(HFD)野生型(WT)小鼠组、高脂饮食(HFD)iNOS~(-/-)小鼠组,四组小鼠每组随机分为两组,其中一组注射胰岛素。未注射胰岛素的四组小鼠测量体重、摄食量、空腹血糖,进行GTT、ITT实验,断颈处死小鼠后取小腿腓肠肌、肝脏、附睾脂肪,包埋部分组织,称取肝脏和附睾脂肪重量。组织切片油红O染色,检测骨骼肌脂质异位沉积。Western Blot检测p-IRS1 S307。胰岛素刺激的四组小鼠,Western Blot检测胰岛素信号通路p-Akt S473。第三部分:用普通饲料和高脂饲料分别喂养WT小鼠和iNOS~(-/-)小鼠,分为Chow WT小鼠组、Chow iNOS~(-/-)小鼠组、HFD WT小鼠组、HFD iNOS~(-/-)小鼠组,Western Blot检测四组小鼠小腿腓肠肌、肝脏、附睾脂肪组织中的p-NF-κB p65、p-IKKα/β、p-JNK T183/Y185。结果:第一部分结果显示:HFD WT小鼠胰岛素抵抗后,iNOS mRNA在胰岛素靶组织中显著增加。第二部分结果显示:与Chow WT组小鼠相比,HFD WT小鼠组体重、附睾脂肪重量、肝重、p-IRS1 S307显著增加、糖耐量受损、胰岛素敏感性受损、骨骼肌脂质异位沉积加重。HFD WT小鼠比Chow WT小鼠胰岛素靶组织的p-Akt S473显著降低。与HFD WT小鼠组相比,HFD iNOS~(-/-)小鼠组体重、附睾脂肪重量、肝重、p-IRS1 S307显著降低、糖耐量改善、胰岛素敏感性改善、骨骼肌脂质异位沉积减轻。HFD iNOS~(-/-)小鼠比HFD WT小鼠p-Akt S473显著增加。提示iNOS通过胰岛素信号通路调控糖脂代谢。第三部分结果显示:HFD WT小鼠组的小腿腓肠肌、肝脏、附睾脂肪p-NF-κB p65、p-IKKα/β、p-JNK T183/Y185显著高于Chow WT小鼠组。HFD iNOS~(-/-)小鼠小腿腓肠肌、肝脏、附睾脂肪p-JNK T183/Y185均低于Chow WT小鼠组。与HFD WT小鼠组相比,HFD iNOS~(-/-)小鼠组小腿腓肠肌、附睾脂肪p-NF-κB p65、p-IKKα/β无显著变化。与HFD WT组相比,HFD iNOS~(-/-)小鼠肝脏p-NF-κB p65、p-IKKα/β显著降低,提示iNOS的表达影响NF-κB和JNK信号通路。结论:1.高脂饮食(HFD)升高骨骼肌、肝脏、附睾脂肪中iNOS mRNA表达。2.iNOS通过调控胰岛素信号通路影响糖脂代谢。3.iNOS影响NF-κB和JNK信号通路。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R587.1
【部分图文】：

理至 Excel 中，将每个样品 iNOS 的 Ct 值/样品 -actin量=2^-ΔΔCt。（ΔCt=iNOS Ct - -actin Ct，ΔΔCt=Δ数±标准误（mean±SE），数据由 GraphPad Prism6 5 认为有统计学意义。（HFD）诱导小鼠骨骼肌中 iNOS mRNA 的表达总体重的 40％，是利用餐后葡萄糖的主要部位。iNO要作用。本实验使用高脂饲料喂养 WT 小鼠造成肥胖-time PCR 检测胰岛素靶组织腓肠肌中 iNOS 的 mRNA组倍数为 2.1±0.19 倍，HFD 组骨骼肌 iNOS mRNA 水 1，p＜0.0001。

图 2. 高脂饮食（HFD）对肝脏 iNOS mRNA 的影响***p＜0.001，n=5。食（HFD）诱导小鼠附睾脂肪中 iNOS mRNA 表达增的证据表明，脂肪细胞不仅可以提供能量储存，还部分，参与多种疾病。本实验使用高脂饲料喂养野胖和胰岛素抵抗，Real-time PCR 检测胰岛素靶组A 水平。HFD 组相比 Chow 组倍数为 1.93±0.08 倍 mRNA 水平显著高于 Chow 组，见图 3，**p＜0.01。

图 2. 高脂饮食（HFD）对肝脏 iNOS mRNA 的影响***p＜0.001，n=5。饮食（HFD）诱导小鼠附睾脂肪中 iNOS mRNA 表达增加多的证据表明，脂肪细胞不仅可以提供能量储存，还可成部分，参与多种疾病。本实验使用高脂饲料喂养野生肥胖和胰岛素抵抗，Real-time PCR 检测胰岛素靶组织NA 水平。HFD 组相比 Chow 组倍数为 1.93±0.08 倍，S mRNA 水平显著高于 Chow 组，见图 3，**p＜0.01。
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本文编号：2875284