苯丙酮尿症常见突变位点检测及中国人群PAH基因突变谱的调查

发布时间：2017-04-17 00:13

  本文关键词：苯丙酮尿症常见突变位点检测及中国人群PAH基因突变谱的调查，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：苯丙酮尿症(phenylketonuria, PKU)是一种常见的常染色体隐性遗传代谢病,严重危害着人类健康。该病主要是由于苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase, PAH)基因突变所致,使得PAH活性下降或者缺乏,导致苯丙氨酸不能正常代谢,血液、组织中的苯丙氨酸及其旁路代谢产物堆积,最终导致中枢神经系统受到不可逆的损害,而出现精神行为异常、癫痫和智力低下等症状。PKU是一种可通过饮食控制进行治疗的遗传病,早发现早治疗是其治疗的关键,但是昂贵的治疗费用给家庭和社会带来了沉重的经济负担,而且不能从根本上降低PKU患儿的出生率。目前,解决这一系列问题的重要手段是积极地开展基因诊断和产前诊断。本论文利用实时PCR技术平台,提出了一种快速、准确检测PKU基因突变的新方法,并将该方法应用于中国人群PAH基因突变谱的研究当中,最终完善了中国人群的PAH基因突变谱,具有重要的临床意义,为中国的PKU防控奠定了基础。 第一章,分别对PKU的发现、分类和分子机制,以及PAH基因的特点进行综述,并且介绍了临床常用的生化检测方法和基因诊断的研究进展,另外还对PKU的流行病学研究现状,主要包括PKU的筛查与产前诊断开展现状和PAH基因突变谱的研究状况进行概述。最后,提出了本论文的研究目的、内容及意义。 第二章,我们采用了多色探针熔解曲线分析技术用于PAH基因突变的快速检测。首先对该技术的原理进行了详细的介绍,之后针对中国人群PAH基因突变的特点,我们建立了三管四色的突变检测体系,实现了对中国人群常见的27种PAH基因突变类型的检测,并系统考察了该项技术应用于突变检测的可行性。整个实验过程可以在4小时内完成,灵敏度达到100pg人类基因组DNA/reaction。最后对112份临床标本进行双盲实验,其中除了17个等位基因在体系检测范围之外,剩余207个等位基因和DNA测序结果一致,验证了该体系检测PAH基因突变的准确性和可靠性。 第三章,为深入了解中国人群PAH基因的突变类型及突变频率,绘制中国人群的PAH基因突变谱,我们联合北京大爱天使苯丙酮尿症罕见病关爱中心(PKU联盟)和WHO遗传病社区控制合作中心(中国医学科学院基础医学研究所)开展了“轻吻一刻：中国PKU突变谱”大型公益研究项目。以多色探针熔解曲线分析技术为主,结合DNA测序技术,对来自中国各地的307个PKU家系共929份唾液标本进行PAH基因突变检测,并对检测结果进行统计分析,最终给出了目前覆盖地域最广、人群最大、突变类型最多、家系信息最为完整的中国人群PAH基因突变谱。
【关键词】：苯丙酮尿症 多色探针熔解曲线分析 PAH基因突变谱
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R589
【目录】：

• 目录4-6
• Contents6-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 第一章 苯两酮尿症及其诊断概述12-30
• 第一节 PKU概述12-15
• 第二节 PKU诊断概述15-20
• 2.1 生化检测方法16-17
• 2.2 分子生物学检测方法17-20
• 第三节 PKU的防治与研究现状20-22
• 3.1 PKU的筛查与产前诊断20-21
• 3.2 PAH基因突变谱的调查21-22
• 第四节 本论文的研究内容及意义22-24
• 参考文献24-30
• 第二章 多色探针熔解曲线分析技术用于PKU的常见突变检测30-61
• 第一节 引言30-32
• 第二节 材料和方法32-43
• 第三节 结果43-55
• 3.1 27种PAH基因突变质粒的构建43-44
• 3.2 人工合成的靶序列熔解曲线分析考察各探针检测突变的能力44-45
• 3.3 单重单色实时PCR及熔解曲线分析体系的建立45-47
• 3.4 多重多色实时PCR及熔解曲线分析体系的建立47-48
• 3.5 多重多色突变检测体系的检测灵敏度48-50
• 3.6 临床标本的双盲检测50-55
• 第四节 讨论55-58
• 参考文献58-61
• 第三章 中国人群PAH基因突变谱的调查61-76
• 第一节 引言61-62
• 第二节 材料和方法62-66
• 第三节 结果66-71
• 3.1 唾液基因组DNA的提取66-67
• 3.2 样本检测67-68
• 3.3 PAH基因突变谱的建立68-71
• 第四节 讨论71-75
• 参考文献75-76
• 英文缩写索引76-77
• 致谢77-78

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：311997