组蛋白乙酰化和甲基化在自身免疫性甲状腺炎中的作用研究

发布时间：2021-04-24 02:54

　　背景:自身免疫性甲状腺炎（Autoimmune thyroiditis,AIT）又称桥本甲状腺炎（Hashimoto thyroiditis,HT）,是一种典型的器官特异性自身免疫性甲状腺疾病。患者通常以血清抗甲状腺过氧化物酶抗体（Thyroid peroxidase antibody,TPOAb）和抗甲状腺球蛋白抗体（Thyroglobulin antibody,TgAb）滴度的显著升高为主要特征。桥本甲状腺炎的发病机制尚不完全清楚,目前认为是遗传易感性和环境因素的相互作用导致对甲状腺自身抗原的免疫耐受破坏,从而导致疾病的发生。表观遗传学为环境因素和遗传背景之间的联系提供了合理解释。表观遗传修饰是不伴原始DNA序列改变的稳定可遗传的基因表达改变,主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰（主要为乙酰化和甲基化）和microRNA（miRNA）,对于维持正常的生长发育、分化以及基因组稳定意义重大。组蛋白乙酰化是基因转录激活的重要标识,而组蛋白甲基化的氨基酸残基和数量共同决定其对基因调控的作用。组蛋白H3赖氨酸4甲基化（histone H3lysine 4 methylation,H3K4me）被... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :自身免疫甲状腺炎患者甲状腺组织中组蛋白修饰水平及调控酶的表达改变
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂及仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象及分组
        2.3 总RNA提取及Real-time PCR
            2.3.1 RNA提取
            2.3.2 反转录
            2.3.3 Real-time PCR
        2.4 人甲状腺石蜡切片免疫组织化学染色
            2.4.1 甲状腺组织石蜡包埋及切片
            2.4.2 甲状腺组织石蜡切片免疫组化染色
        2.5 组蛋白提取及组蛋白H3整体乙酰化水平测定
            2.5.1 甲状腺组织总体组蛋白提取
            2.5.2 甲状腺组织总体组蛋白BSA定量
            2.5.3 ELISA检测甲状腺组织组蛋白H3 总体乙酰化水平
            2.5.4 ELISA检测甲状腺组织组蛋白H3K4me1、H3K4me3、H3K27me3 水平
        2.6 统计分析
    3 结果
        3.1 研究对象基本情况
        3.2 甲状腺组织组蛋白乙酰化
            3.2.1 组蛋白去乙酰化酶在HT患者及对照组甲状腺组织中的m RNA表达水平
            3.2.2 HDAC2和HDAC5在HT患者及对照组甲状腺组织中的蛋白表达水平及定位
            3.2.3 P300和CREBBP在 HT患者及对照组甲状腺组织中的表达水平及定位
            3.2.4 HT患者及对照组甲状腺组织中H3ac水平
            3.2.5 组蛋白乙酰化的相关指标与甲状腺功能的相关性分析
        3.3 甲状腺组织组蛋白甲基化
            3.3.1 HT患者及对照组甲状腺组织中KMT2A-D的 m RNA表达水平
            3.3.2 HT患者及对照组甲状腺组织中H3K4me1和H3K4me3 水平
            3.3.3 HT患者及对照组甲状腺组织中JMJD3 表达水平及H3K27me3 水平
            3.3.4 组蛋白甲基化的相关指标与甲状腺功能的相关性分析
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :组蛋白修饰在自发性自身免疫性甲状腺炎小鼠模型中的作用研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂及仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象及分组
        2.3 标本收集与处理
        2.4 流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚型
            2.4.1 小鼠脾脏细胞单个核细胞制备
            2.4.2 流式细胞术检测T淋巴细胞亚型
        2.5 ELISA检测Tg Ab
        2.6 甲状腺冰冻切片HE染色
            2.6.1 甲状腺组织冰冻切片制备
            2.6.2 冰冻切片HE染色
        2.7 总RNA提取及Real-time PCR
        2.8 小鼠甲状腺冰冻切片免疫组化染色
        2.9 统计分析
    3 结果
        3.1 SAT小鼠模型建立评估
        3.2 SAT小鼠甲状腺组织中组蛋白修饰酶的m RNA水平改变
        3.3 PF CBP1和GSK J4 干预对小鼠体重及甲状腺相对重量的影响
        3.4 PF CBP1和GSK J4 干预对小鼠甲状腺组织形态学影响
        3.5 PF CBP1和GSK J4 干预对小鼠血清Tg Ab水平影响
        3.6 PF CBP1和GSK J4 干预对小鼠脾脏Th1和Th17 细胞比例影响
        3.7 PF CBP1和GSK J4 干预对小鼠甲状腺H3K9-14ac和H3K27me3 的水平影响
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3156535