银杏叶提取物对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化能力的影响

发布时间：2017-04-29 10:06

  本文关键词：银杏叶提取物对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化能力的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：一、研究背景 随着我国经济、医疗的快速发展，人民的生活条件的稳步提高，老年人在人口中的比例也大幅增加，我国正步入老龄化社会，伴随而来的老龄化疾病也越发凸显，如骨质疏松症，这常发生于老年人的疾病，可引起骨组织低骨量和显微结构恶化。在青少年体内，骨代谢是平衡的，但老年人，这种平衡被打破，骨量不断减少，骨强度逐渐降低，增加了骨折的风险，这迫使学者们找寻骨质疏松的病因并加以治疗。 骨髓间充质干细胞（BMMSCs）在骨髓中发现，数量稀少，其多向分化的能力使其引起学者们的关注，如果BMMSCs过多地向脂肪细胞分化，则相应减少了向成骨细胞分化的细胞数目，这会引起成骨缺陷致使骨质疏松症的发生，而相反，则为骨质疏松症的治疗提供了一个新的方向。 如何防治骨质疏松症并在治疗的过程中减少治疗产生的副作用一直是学者们研究的热点问题。近年来，学者们再次关注一种选择性雌激素受体调节剂—银杏叶提取物（ginkgo biloba extract，GBE），在其抗氧化、调节血管活性、清除自由基、抗血小板活化因子、神经保护、增加血流量等主要药理作用之外，发现其可促进BMMSCs在体外成骨分化，但有关BMMSCs在GBE作用下成脂分化能力的变化尚未见报道。本研究旨在探讨不同浓度GBE对BMMSCs成脂分化能力的影响，阐明在细胞水平上GBE对骨质疏松的治疗和预防意义。 二、研究目的： 探讨不同浓度银杏叶提取物（GBE）对大鼠的骨髓间充质干细胞（BMMSCs）成脂分化能力的影响，阐明在细胞水平上GBE对骨质疏松治疗及预防的意义。 三、研究内容： 1、将50、100、150、200和400mg·L-1GBE与成脂诱导液加入到已纯化的第三代BMMSCs中（50、100、150、200、400mg·L-1GBE组），与不加药对照组共培养7d，观察BMMSCs的形态学和表面抗原CD44、CD105和CD34的表达。 2、采用油红O染色观察BMMSCs中脂滴形成情况；采用吸光值（A）对BMMSCs的成脂能力进行定量分析。 3、采用RT-PCR法检测BMMSCs中脂肪组织脂肪酸结合蛋白（AP2）和过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）的亚型（PPAR-γ）mRNA的表达水平。 四、研究结果： 1、形态学检测，体外培养的原代BMMSCs3d后可见细胞呈梭形，7d后细胞呈漩涡状生长，同向排列，表面抗原标记物染色显示CD44及CD105阳性表达，而CD34表达呈阴性，证明其为BMMSCs。 2、油红O染色约7天后显微镜下见大量脂滴形成，并随着GBE浓度的增大脂滴数量减少；吸光值检测结果显示，与对照组相比，随着GBE浓度的提高A510值逐渐减小（P0.05）。 3、RT-PCR结果显示，与对照组相比，随着GBE浓度的提高，PPAR-γ、AP2mRNA表达量逐渐降低(P0.05)。 五、研究结论： GBE在体外可抑制BMMSCs的成脂分化能力，，且抑制能力随着GBE浓度的增高而逐渐增强。
【关键词】：银杏叶提取物 骨髓间充质干细胞 成脂分化 骨质疏松
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R580
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 缩略词表11-14
• 第一章 引言14-16
• 第二章 综述16-23
• 2.1 骨质疏松的发病机制16-18
• 2.2 骨质疏松治疗药物18-20
• 2.3 银杏叶提取物的组成及其成骨作用20-23
• 第三章 材料与方法23-28
• 3.1 主要实验试剂23
• 3.2 主要实验仪器23-24
• 3.3 实验动物24
• 3.4 GBE 的配置24
• 3.5 BMMSCs 的分离培养24-25
• 3.6 BMMSCs 形态学观察及表面抗原鉴定25
• 3.7 油红 O 染色鉴定 GBE 对 BMMSCs 成脂分化能力的影响25-26
• 3.8 GBE 对 BMMSCs 成脂分化能力影响的检测26
• 3.9 RT-PCR 法检测各组 BMMSCs 中 AP2、PPAR-γ mRNA 的表达水平26
• 3.10 统计学分析26-28
• 第四章 结果28-32
• 4.1 BMMSCs 的形态学28
• 4.2 BMMSCs 表面抗原鉴定28-29
• 4.3 各组 BMMSCs 成脂分化能力29-30
• 4.4 各组 BMMSCs 的 A510值30-31
• 4.5 各组 BMMSCs 中 AP2、PPAR-γ mRNA 表达水平31-32
• 第五章 讨论32-36
• 第六章 结论36-37
• 参考文献37-44
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果44-46
• 发表论文及参与课题情况46-47
• 致谢47

【参考文献】

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1 苏欣;廖二元;;甲状旁腺激素及其拟似剂治疗骨质疏松症的研究进展[J];国际内科学杂志;2007年11期

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本文编号：334649