MicroRNA126对人正常肝细胞葡萄糖代谢的影响

发布时间：2017-05-07 11:03

  本文关键词：MicroRNA126对人正常肝细胞葡萄糖代谢的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:糖尿病是一种复杂的代谢紊乱性疾病,血糖代谢紊乱是其主要特征。研究表明,葡萄糖的代谢紊乱可能与高血糖代谢记忆、炎症反应以及线粒体功能异常有关,但有关糖尿病的具体发病机制,到目前仍不明确。Micro RNAs(mi RNAs)是一类序列短小的、进化上高度保守的、非编码的RNA,由20-25个单核苷酸组成。mi RNAs通过与靶基因3’非编码区结合,导致m RNA降解或直接抑制m RNA的翻译,对基因转录后进行调控,从而参与许多生理病理过程的精细调节。研究发现,mi RNAs在细胞增殖和凋亡、炎症反应、信号传导、细胞代谢以及肿瘤的发生发展过程中起到至关重要的作用。大量的实验证据[1]表明,mi RNAs在维持机体葡萄糖的稳态和糖尿病的发展中有重要的调节作用。Anna Zampetaki等人发现在糖尿病患者的血浆中micro RNA126(mi R-126)的相对表达量明显降低,提出mi R-126能准确鉴别糖尿病高危者和健康人,可以作为糖尿病疾病发展的标志物。同时,我课题组在前期研究发现,mi R-126在1型和2型糖尿病患者血浆中水平降低,其表达水平与炎症反应以及脂代谢紊乱等多种糖尿病危险因素相关。肝脏是人体主要的葡萄糖代谢场所,在糖尿病的发生发展中起着至关重要的作用。mi R-126对人正常肝细胞葡萄糖代谢的具体作用如何呢?本研究针对改变chang liver细胞mi R-126的表达量,以探讨mi R-126表达水平改变时对细胞胰岛素反应的敏感性和葡萄糖代谢的影响,以进一步了解糖尿病的发病机理。材料和方法:1.Chang liver细胞分为3组,正常对照组、negative control FAM(NC-FAM)组、micro RNA inhibitor NC-FAM(IN-NC-FAM)组,分别用不同浓度10、20、40、80n M在lipofectamine2000(Lip2000)作用下转染细胞,确定最佳转染条件。2.将chang liver细胞分为6组,分别为micro RNA126 mimic(mi R-126)组、negative control(NC)组、micro RNA126 inhibitor(In-mi R-126)组、micro RNA inhibitor negative control(In-NC)组、lipofectamine2000(Lip2000)组和正常细胞对照组,按照上述优化的转染条件将对应的人工合成的核苷酸序列转染入相应的细胞组。3.实时荧光定量聚合酶联反应(q RT-PCR)检测各组细胞mi R-126表达水平。4.将步骤2中各组细胞转染后培养48h,用人工合成胰岛素(100n M)刺激12小时,用GOD-POD法测上清葡萄糖浓度,BCA法测板下层细胞蛋白浓度,蒽酮法测定细胞糖原含量,乳酸测定试剂盒测定乳酸生成量,丙酮酸激酶测试盒测定丙酮酸激酶活力,用糖原含量/蛋白含量(μmol·mg-1)表示细胞糖原合成量;在乳酸作用下,用上清葡萄糖生成量/蛋白浓度(mmol·mg-1)的值表示细胞糖异生量;在高糖环境(葡萄糖浓度11.1mmol/L)下,用乳酸生成量/蛋白浓度(mmol·mg-1)的值和丙酮酸激酶活力/蛋白浓度(U/gprot)表示细胞糖酵解量,从而观察mi R-126在正常肝细胞含量不同时,对细胞葡萄糖利用率、糖原合成、糖异生以及糖酵解作用的影响。结果:1.在无血清无抗生素的培养基中,转染6小时,荧光显微镜下观察,FAM标记的无意对照序列(NC-FAM、IN-NC-FAM)能够有效转染人正常肝细胞,且呈浓度依赖性,确定80n M为适宜转染浓度。2.q RT-PCR结果显示:mi R-126组与其他各组相比较,mi R-126组mi R-126相对表达量明显高于其余的各实验组以及对照组,差异具有统计学意义(P0.05);In-mi R-126组、NC组、In-NC组、lip2000组与正常对照组相比较mi R-126的相对表达量变化无统计学意义(P0.05)。3.将各核苷酸序列转染至对应细胞后,mi R-126组较正常对照组葡萄糖消耗量下降(33.66±2.55 vs 59.12±4.03 P0.05),糖原合成量明显下降(4.35±0.33 vs 8.42±0.56 P0.05),细胞乳酸生成量明显下降(12.28±1.72 vs 22.51±1.25 P0.05),丙酮酸激酶活力下降(120.87±26.23 vs 277.39±57.60 P0.05),其余各组相比较差异不显著;mi R-126组与正常对照组相比糖异生量增加(17.05±0.88 vs 13.05±0.41P0.05),In-mi R-126组与正常对照组相比较糖异生量下降(7.41±1.39 vs13.05±0.41 P0.05),其余各组相比较无显著差异。结论:mi R-126在人正常肝细胞过表达时,细胞葡萄糖利用率减少,对胰岛素的敏感性降低,通过减少细胞糖原合成、增加糖异生、减少乳酸生成以及丙酮酸激酶活力的途径调节肝脏葡萄糖代谢,可能增加肝糖输出。
【关键词】：microRNA126 人正常肝细胞株 葡萄糖代谢 糖尿病
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.1
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 中英文缩写词12-14
• 前言14-16
• 材料与方法16-32
• 结果32-39
• 讨论39-44
• 结论44-45
• 参考文献45-48
• 综述 Micro RNA126的生物学研究进展48-64
• 参考文献59-64
• 个人简历、在校期间发表的学术论文64-65
• 致谢65-66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 胡燕;李永菊;陈超;朱顺飞;郭萌萌;刘思静;郑静;秦娜琳;徐林;;microRNA-126基因敲减小鼠的鉴定及其血糖水平变化[J];中南大学学报(医学版);2015年01期

2 钱荣立;金世鑫;;糖尿病分子生物学研究的新领域:微RNAs(miRNAs)与β细胞生物学、胰岛素抵抗、糖尿病及其并发症[J];中国糖尿病杂志;2011年11期

3 任彦红;黄婷;时学秀;闫丹丹;栗夏连;;循环miRNA-126在2型糖尿病患者中的表达变化及其相关性研究[J];中国糖尿病杂志;2014年07期

  本文关键词：MicroRNA126对人正常肝细胞葡萄糖代谢的影响，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：349712