从NF-κB-Jmjd3信号轴下游基因表达的表观调控角度分析衰老血清损伤人血管内皮细胞功能的研究

发布时间：2025-01-05 22:49

　　目的:通过将老年人血清作用脐静脉血管内皮细胞后,观察衰老机体血清对血管内皮细胞生物学活性的影响;研究衰老机体血清对内皮细胞的炎性介质分泌的作用;了解调控内皮细胞炎性介质的NF-κB-Jmjd3信号通路的活化情况,分析其可能的表观遗传学调控机制。期望对与衰老相关性疾病的诊断及治疗提供新思路和新靶点。方法:1、研究对象的选择及分组:青年组:20～30岁健康体检者16例,平均年龄(25.60±1.97)岁;老年组:60～70岁健康体检者16例,平均年龄(66.60±4.78)岁;高龄老年组16例:80岁以上健康老年人,平均年龄(85.86±5.79)岁。取清晨空腹静脉血5ml,离心后分离血清分装后放入-80℃冰箱冷冻待用。实验时,将冷冻收集好的血清按健康青年组(25y)、健康老年组(65y)、健康高龄老年组(85y)分别混合制成3个标本池。2、脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的分离、培养、复苏、传代、鉴定:取传代至3～5代的细胞于对数生长期进行实验,随机分组为25y,65y和85y组,分别以健康青年组、健康老年组和健康高龄老年样本池中的血清配成条件培养基作用HUVECs细胞;根据检测需要分别...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 引言
第2章 实验材料及方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要试剂及材料
        2.1.2 主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 器材的准备
        2.2.2 主要溶液的配制
        2.2.3 HUVECs的分离、培养、传代及鉴定
        2.2.4 研究对象的选择及其血清标本的收集
        2.2.5 CCK8法检测细胞活力
        2.2.6 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色实验
        2.2.7 流式细胞术分析细胞周期
        2.2.8 流式细胞仪分析细胞活性氧水平
        2.2.9 划痕实验
        2.2.10 免疫荧光染色技术观察各组血清诱导HUVECs后，内皮细胞内NF-κB/p65的核表达变化
        2.2.11 免疫荧光染色技术观察各组血清诱导HUVECs后，内皮细胞内Jmjd3的表达变化
        2.2.12 免疫荧光染色技术观察各组血清诱导HUVECs后，内皮细胞内H3K27me3的表达变化
        2.2.13 细胞免疫荧光染色技术观察各组血清诱导HUVECs后，细胞内H3K27me2的表达变化
        2.2.14 荧光实时定量PCR(qRT-PCR)测定内皮细胞炎性介质和粘附分子的表达
        2.2.15 Luminex技术分析各组血清池中炎性介质蛋白水平
    2.3 统计学处理
第3章 结果
    3.1. 血清池中炎性介质的蛋白水平
    3.2. 脐静脉内皮细胞的形态及鉴定
    3.3. 内皮细胞活性变化
    3.4. 内皮细胞衰老情况
    3.5. 内皮细胞周期的变化
    3.6. 内皮细胞氧化应激反应的变化
    3.7. 内皮细胞迁移修复能力的变化
    3.8. 内皮细胞内NF-ΚB/p65核转位及表达的变化
    3.9. 内皮细胞内Jmjd3表达的变化
    3.10. 内皮细胞内HEK27ME3表达的变化
    3.11. 内皮细胞内HEK27ME2表达的变化
    3.12. 内皮细胞炎性介质和粘附分子的基因表达情况
第4章 讨论
第5章 结论
第6章 本论文的创新点
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：4023391