促甲状腺激素对脂肪细胞促炎症因子分泌的影响

发布时间：2017-06-04 00:08

  本文关键词：促甲状腺激素对脂肪细胞促炎症因子分泌的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：近年来,人们逐渐认识到脂肪组织不仅是能量的储备场所,同样也是重要的内分泌器官,脂肪细胞可以通过旁分泌、自分泌和远距离分泌方式分泌多种生物活性因子,如肿瘤坏死因子-a (TNF-α)、白介素-6(IL-6)、瘦素及抵抗素等,引发机体炎症反应,与胰岛素抵抗(R)的发生相关联。IR是引起葡萄糖耐量受损、2型糖尿病(T2DM)、高血压、血脂异常、动脉粥样硬化等多种非感染性亚临床炎症反应性疾病发生发展的中心环节,因此,探索脂肪细胞分泌促炎症因子的始动因素逐渐成为IR病因学研究的热点。目前,促甲状腺激素(TSH)促进脂肪细胞分泌促炎症因子的研究主要集中在亚临床甲状腺功能减退及心血管疾病方面,且研究发现TSH受体(TSHR)存在于除甲状腺外的多种组织及细胞表面,故本研究拟探讨TSH是否与脂肪细胞表面TSHR结合后,刺激TNF-α的分泌,进而可能参与脂肪细胞IR的发生发展。 方法：体外培养并诱导3T3-L1前脂肪细胞为成熟脂肪细胞。以成熟脂肪细胞为研究对象,利用小干扰RNA (siRNA)技术针对TSHR基因构建质粒,并分别转染成熟脂肪细胞,通过western blotting方法检测TSHR蛋白表达情况,以验证RNA干扰效果并筛选能成功沉默TSHR的质粒。双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)方法分别检测0.1mIU/ml牛TSH刺激沉默TSHR前、后成熟脂肪细胞0-24h培养基中的TNF-a水平,确定产生最佳效应时间。然后,以不同浓度牛TSH (0.01mIU/ml、0.1mIU/ml、1mIU/ml)刺激沉默前、后的成熟脂肪细胞,应用ELISA方法检测培养基中TNF-α水平。 结果：1.3T3-L1前体脂肪细胞在换用含有诱导剂的细胞培养液至第10天后,诱导为成熟脂肪细胞。2.利用siRNA技术设计4组TSHR shRNA质粒,与正常对照组相比,shRNA1组、shRNA2组与shRNA3组TSHR蛋白明显减少(0.07+0.03,0.04±0.01,0.19a=0.04),差异具有统计学意义(P0.01)；与shRNA3组相比,shRNA1组与shRNA2组TSHR蛋白减少具有统计学意义(P0.01)；shRNA1组与shRNA2组之间TSHR蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。与正常对照组相比,2ug-24h组、4ug-24h组蛋白表达减少(0.32±0.10,0.314±0.05),差异具有统计学意义(P0.05),4ug-48h组TSHR蛋白表达明显减少(0.17±0.04),差异具有统计学意义(P0.01),2ug-12h组、2ug-48h组、4ug-12h组及6ug组差异无统计学意义(P0.05)。3.0.1mIU/ml牛TSH刺激成熟脂肪细胞Oh至24h培养基中,TNF-α水平随时间延长呈增加趋势,4h培养基中TNF-α水平最高(537.07±45.19ng/L),与24h差异无统计学意义(547.94±32.32ng/L, P0.05);0.1mIU/ml牛TSH刺激已沉默TSHR的成熟脂肪细胞,在刺激Oh至24h培养基中,TNF-α水平随时间延长缓慢上升,与对照组相比,差异均无统计学意义(P0.05)。4.与空白对照组相比,不同浓度牛TSH (0.01mIU/ml、0.1mIU/ml、1.0mIU/ml)刺激正常成熟脂肪细胞4h后培养基中TNF-α水平均呈上升趋势,差异具有统计学意义(522.67±36.22vs431.51±30.10、411.08±12.03、341.85±12.00ng/L, P0.05或P0.01)；5.与对照组相比,1.0mIU/ml牛TSH刺激转染前、后成熟脂肪细胞4h后,空白及阴性组培养基中TNF-α水平均呈上升趋势,差异具有统计学意义(522.67±36.22vs341.85±12.00ng/L,521.26±34.23vs340.54±12.53, p0.05); shRNA组培养基中TNF-α水平较前差异无统计学意义(368.50±26.11vs339.62±14.39,P0.05)。 结论：TSH与脂肪细胞表面TSHR结合后,时间依赖性及剂量依赖性地刺激TNF-α的分泌；临床上通过密切监测血清TSH水平,预防亚临床甲状腺功能减退及其相关并发症的发生发展,可能有助于降低炎症因子的水平,进而阻止或延缓IR等相关疾病的出现。
【关键词】：促甲状腺激素 3T3-L1 脂肪细胞 促甲状腺激素受体 shRNA 肿瘤坏死因子-α
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R587.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 对象和方法15-27
• 1 3T3-L1细胞的培养、诱导分化及质粒转染15-21
• 1.1 主要试剂15
• 1.2 主要仪器15-16
• 1.3 细胞培养16-18
• 1.4 质粒的提取与转染18-21
• 1.5 干预实验具体过程21
• 2 细胞培养基TNF-α浓度的测定21-22
• 2.1 主要试剂及仪器21
• 2.2 实验原理21
• 2.3 实验步骤21-22
• 3 TSHR总蛋白的Western Bloting检测22-26
• 3.1 主要试剂22-23
• 3.2 主要仪器23
• 3.3 实验原理23
• 3.4 实验步骤23-26
• 4 统计学方法26-27
• 结果27-37
• 1 3T3-L1前脂肪细胞的培养及诱导分化27-28
• 2 TSHR shRNA质粒转染3T3-L1成熟脂肪细胞及TSHR蛋白表达情况28-32
• 2.1 TSHR shRNA质粒转染效率28
• 2.2 不同组TSHR shRNA质粒转染48h对TSHR蛋白表达的影响28-30
• 2.3 不同时间、质量TSHR shRNA转染对TSHR蛋白表达的影响30-32
• 3 TSH对3T3-L1脂肪细胞分泌TNF-α的影响32-37
• 3.1 0.1mIU/ml牛TSH刺激正常成熟脂肪细胞确定最佳时间段32
• 3.2 O.1mIU/ml牛TSH刺激已沉默TSHR的成熟脂肪细胞不同时间段培养液TNF-a的水平32
• 3.3 不同浓度牛TSH刺激成熟脂肪细胞4h后培养液TNF-α的水平32-33
• 3.4 1.0mIU/ml牛TSH刺激转染前后成熟脂肪细胞4h后培养液TNF-α的水平33-37
• 讨论37-48
• 1 3T3-L1脂肪细胞37-38
• 2 促甲状腺激素38-43
• 3 小干扰RNA43-44
• 4 肿瘤坏死因子-α44-46
• 5 TSH与炎症因子46-48
• 结论48-49
• 不足和展望49-50
• 参考文献50-57
• 发表论文和参加科研情况说明57-58
• 综述 TSH的甲状腺外作用58-76
• 综述参考文献68-76
• 致谢76

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 王凤龙,银梅,日穆德玛;鸡肿瘤坏死因子的诱生及活性检测[J];动物医学进展;2003年05期

2 吕红彬;闫乃红;罗清礼;夏庆杰;曹桂群;张发强;;促甲状腺素受体在BALB/c小鼠主要组织和器官的分布及其意义[J];解剖学杂志;2006年05期

3 葛勤敏;苏青;;促甲状腺激素受体的裂解和脱落[J];上海交通大学学报(医学版);2007年03期

  本文关键词：促甲状腺激素对脂肪细胞促炎症因子分泌的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：419537