用酵母双杂交筛选与HIV Tat相互作用的宿主因子

发布时间：2017-09-12 06:46

  本文关键词：用酵母双杂交筛选与HIV Tat相互作用的宿主因子

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【摘要】：目的通过酵母双杂交试验筛选与HIV Tat蛋白相互作用的宿主因子。方法对构建的pGBKT7-tat进行自激活和半乳糖苷试验。运用酵母双杂交实验以HIV Tat作为诱饵,与人均一化基因库进行初筛。对筛选出来的阳性克隆进行测序分析。结果构建的pGBKT7-tat无自激活特性和细胞毒性,然后进行酵母双杂交试验。结果发现在DDO/X/A平板上出现47个阳性的蓝色斑点,在QDO/X/A平板上进行进一步筛选,对再次出现的8个蓝色斑点进行测序。在GenBank中对相互作用的人体基因进行BLAST分析,根据基因注释推测其在病毒与机体相互作用过程中可能发挥的作用。结果测出5个不同的基因,这5个不同的基因分别为羧肽酶N、酪氨酸磷酸酶受体M、ATP1B1、锌指蛋白MYM2和锌指蛋白MYM5。结论本研究新筛选出羧肽酶、酪氨酸磷酸酶受体和ATP1B1病程相关蛋白及两个锌指蛋白等5种功能蛋白与HIV Tat相互作用,为进一步研究HIV Tat蛋白功能提供依据。
【作者单位】： 华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科;华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤生物医学中心;
【关键词】： 酵母双杂交 HIV Tat 蛋白质相互作用 天然免疫 病毒复制
【基金】：国家科技重大专项项目(No.2012ZX10004207-004)
【分类号】：R512.91
【正文快照】： 人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiencyvirus,HIV)是艾滋病的主要病原体。自从1981年发现以来,目前已经成为危害人类生命健康的重大传染性疾病。HIV Tat是一个14kD的蛋白质。它是一个重要的HIV毒力因子,在病毒基因的表达、复制、播散和疾病的进程中发挥重要作用。它不但可

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