沙眼衣原体抗菌素耐药及治疗失败的评估

发布时间：2018-05-05 23:36

  本文选题：沙眼衣原体 + 细胞培养　； 参考：《天津医科大学》2010年硕士论文

【摘要】： 目的探讨对泌尿生殖道沙眼衣原体临床株进行多次传代培养的意义；检测本地区近年来泌尿生殖道沙眼衣原体对大环内酯类、四环素类、喹诺酮类抗菌素的体外药物敏感性；筛查耐药株,并从基因水平上探讨其耐药机制；评价药敏结果与临床疗效的相关性,评估抗菌素耐药与临床治疗失败。 方法培养McCoy细胞至孔板中,置于37℃、5%CO2温箱中孵育,18～24h后生长至致密单层后,接种沙眼衣原体标准株和临床株,培养48～72h后,用卢戈氏碘液染色鉴定培养结果,凡是培养阴性的标本继续传代培养至五代。为评估多次传代后培养法的敏感性,选用沙眼衣原体内源性质粒基因片段为引物,PCR扩增检测沙眼衣原体；42株阳性标本传代培养至感染率达90%以上,收集标本进行9种常用抗菌素的药敏试验。核酸扩增临床分离株的omp1基因并用AluⅠ、MspⅠ双酶切进行基因分型。PCR方法扩增检测四环素耐药质粒tetM基因；同时用RT-PCR, PCR方法分别扩增与大环内酯类耐药相关的23S核蛋白体RNA基因、核糖体蛋白基因L4,通过产物测序检测基因突变；限制性片段分析(RFLP)检测gyrA喹诺酮耐药决定区(Quinolone-Resistance Determining Region, QRDR)常见的基因点突变。统计方法：试验结果采用卡方检验和Spearman相关性分析,确定检验水准a=0.05,应用SPSS16.0统计软件计算卡方值、相关系数,确定P值,P0.05即有统计学意义。 结果299例样本中细胞培养法共检测到104株阳性标本,阳性率为34.78%。初次培养(原代)阳性率5.69%,传代一次后(二代)阳性率为20.07%,传代两次后(三代)阳性率为33.44%,传代三次后(四代)阳性率为34.78%,传代四次后(五代)阳性率仍为34.78%。前三代随着传代,阳性例数及阳性率明显增加,而四代、五代基本上处于稳定趋势。PCR扩增检测结果除了24例培养法检测阴性而PCR法检测为阳性的标本外,余与细胞培养法完全一致。临床标本细胞培养检测结果与临床疗效之间存在关联性(χ2=8.242,P=0.0040.05),差异有统计学意义。临床治疗成功的标本更易于细胞培养,治疗失败的标本不易于细胞培养检测,随着多次传代培养,阳性率明显增加。药敏MIC(单位均为mg／L)结果分别为红霉素：0.5～2,克拉霉素：0.008～0.032,阿奇霉素：0.125～0.5,四环素：0.157～0.625,多西环素：0.063～0.125,米诺环素：0.032～0.128,左氧氟沙星：0.5～1,莫西沙星：0.06～0.12,司帕沙星：0.064～0.128,其中发现2株红霉素耐药株(MIC值：2mg／L),其23s rRNA基因有C2452A、T2611C的突变(大肠杆菌序列编号),红霉素耐药株及敏感株L4基因均发现脯氨酸113(CCG)→亮氨酸(CTG)、脯氨酸156(CCC)→丙氨酸(GCC)两个位点的突变(GenBank NC000117.1),25株临床分离株中检测到tetM基因,未发现gyrA-QRDR基因中Ser83→Ile点突变。将42株临床分离株进行基因分型,结果发现1株为D型,余均为E型。 结论传代培养可以明显提高临床株沙眼衣原体的检出率,盲传一次的检验标准有一定的漏诊率,临床株应传代培养至三代,其培养的成功将为实验室开展该病原体的致病机理、免疫机制、体外药物敏感性检测、耐药机制和保护性疫苗等方面的研究奠定基础。随着时间的推移,抗菌素的敏感性呈不同程度的下降,克拉霉素体外抗沙眼衣原体活性最强。米诺环素,司帕沙星、莫西沙星等均有较强的抗沙眼衣原体感染活性,但其MIC值较以往文献报道增高。C2452A、T2611C的突变导致红霉素低水平耐药,L4基因的点突变可能与红霉素耐药无关,tetM基因阳性率(59.2%)较高,表明体内对四环素敏感性普遍降低。喹诺酮类实验室突变株可能在临床株中并不常见。沙眼衣原体对抗菌素的耐药机制有待进一步研究。E型为沙眼衣原体的优势基因型。以细胞培养法为基础的体外药敏试验与临床疗效之间存在差异。临床治疗失败影响培养结果,沙眼衣原体抗菌素耐药可引起临床治疗失败,需要扩大样本量,建立多中心研究进一步证实。
[Abstract]:Objective To investigate the significance of multiple subcultures in the clinical isolates of Chlamydia trachoma of the urinary tract ;
In recent years , the in vitro drug susceptibility of urinary genital trachoma chlamydia to macrolides , tetracycline and quinolone antibiotics has been detected .
The drug resistant strains were screened and the drug resistance mechanism was discussed from the gene level .
To evaluate the correlation between drug sensitivity and clinical efficacy , and to assess the failure of antibiotic resistance and clinical treatment .



Methods The McCoy cells were cultured in porous plate , incubated in incubator at 37 鈩，

本文编号：1849743