从角质形成细胞核因子κB环节探讨几种抗银屑病药物的作用机制和相互作用

发布时间：2020-03-28 05:50

【摘要】：目的针对皮肤中转录因子核因子-κB(NF-κB)对角质形成细胞增殖所具有的调控作用，对几种抗银屑病药物的抗增殖活性与NF-κB信号途径之间的关系进行了探讨，为进一步揭示相关药物的作用机制，及为研制新的抗银屑病药物提供依据；同时评价抗银屑病药物中某些抑制NF-κB的药物和活化NF-κB的药物共同作用时在作用机制和疗效方面的相互影响，检测两者是否存在协同作用或者潜在的拮抗作用，为NF-κB是否能作为抗银屑病的靶位提供一些线索，也为临床应用提供参考。方法选取良性永生化角质形成细胞株HaCaT作为研究对象，经受试药物处理后，提取所需胞浆和胞核蛋白，采用蛋白印迹法检测胞浆中NF-κB抑制蛋白α(IκBα)表达量的改变，凝胶迁移阻滞试验(EMSA)测定胞核中NF-κB与DNA特异性序列结合活性的变化，以此反映药物对NF-κB信号途径的影响。使用四唑盐比色实验(MTT)检测光吸收度的改变，反映相对活细胞数，作出细胞一周内的生长曲线，显示药物对细胞生长和增殖的影响。RT-PCR检测药物对HaCaT细胞炎症因子IL-8和ICAM-1mRNA表达的影响。所检测的药物包括对NF-κB具有活化作用的药物如地蒽酚(ATL)以及对NF-κB活化具有抑制作用的药物如来氟米特(Lf)和雷公藤内酯醇(T_0)，并选取水杨酸钠(NaSal)作为抑制NF-κB活化的阳性对照药物。结果Ⅰ．外用抗银屑病药物ATL对角质形成细胞HaCaT株IκBα的降解具有促进作用，并呈剂量依赖性，IC_(50)值约为13.8μM，与之相应的是，，进一步实验表明ATL对NF-κB与DNA的结合活性亦具有增强作用；Lf、T_0则对HaCaT细胞株IκBα蛋白的降解和NF-κB与DNA的结合活性均没有影响。Ⅱ．进一步的实验结果表明Lf、T_0以及阳性对照药物NaSal均可抑制ATL对NF-κB信号途径的活化作用，包括抑制ATL促进IκBα降解的作用以及抑制ATL对NF-κB与DNA结合活性的增强作用，并呈剂量依赖性，IC_(50)值分别约为9.68βM和8.95×10~1nM。ATL、Lf、T_0和NaSal抑制HaCaT细胞活性的IC_(50)值分别约为5.26×10~(-5)M、1.13×10~(-3)M、1.59×10~(-6)M和1.06×10~(-2)M，所选定的待测浓度分别为20μM、20μM、0.2μM和1mM，均在各药物和化合物的IC_(50)值以下。在待测浓度的各药物和化合物作用下，6天内细胞的生长曲线与无药对照组相比，存在不同程度的下降趋势，表明HaCaT细胞的增殖活性受到了不同程度的抑制；然而在使用Lf或T_0抑制ATL对NF-κB信号途径的活化后，并没有
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R758.63

【参考文献】