雄激素受体基因CAG多态性及雄激素水平在不同座疮患者中的表达研究

发布时间：2020-04-01 01:38

【摘要】： 目的：本课题研究痤疮患者血清睾酮，游离睾酮和正常人群之间是否存在差异；痤疮人群的白细胞雄激素受体基因CAG微卫星片段长短与正常人群之间是否存在差异；并探讨痤疮患者雄激素受体基因CAG微卫星片段长短、睾酮、游离睾酮水平和中医辨证分型、发病年龄、临床症状轻重等临床表现的相关性。从基因水平和性激素代谢角度探讨痤疮的发病机制，并在一定程度上为中医辨证在该领域的运用提供切实可行的中西医结合的理论基础，更好的服务临床，指导用药，提高医疗水平。方法：所有病历均为武汉市一医院皮肤科痤疮专科门诊的患者。所有患者均填写痤疮专科病历详细记载发病诱因、家族因素、皮损特点、其他临床症状、既往史等相关情况，，编写序号。西医诊断标准参照赵辨主编《临床皮肤病学》第二版(江苏科技出版社)。中医诊断标准参照《中医外科学》第一版(上海科学技术出版社)，并按照中医辨证收集痰瘀结聚型(30例)，肝郁气滞型(30例)。同时收集正常人外周血样本(30例)。所有受试者均在清晨空腹抽取外周静脉血5ml，肝素钠抗凝，3000rmp离心5min，取血浆加入1.5mlEppendorf管中，置于-30℃冰箱中保存。女性受试者选择在月经前7±2天黄体期采血，用放射免疫双抗法测定睾酮(Testosterone, T)。采用单酶联免疫法测定游离睾酮(Free Testosterone, FT)。分别取患者和正常人外周血1.5ml，用EDTA抗凝，用试剂盒提取外周血白细胞的DNA，作为PCR反应模板。配PCR反应体系50ul，内含25mmol／L DNTP2ul，10x Buffer缓冲液5ul，1.5mmol／LMg~(2+)3ul，100pmol／L引物各0.25ul，5U／ulTaqDNA聚合酶0.3ul，模板DNA5 ul，H_2O34.2ul。引物设计：ARS 227 5’CTTTCCAGAATCTGTTCCAGAGCGTGC3’；ARA 509 5’GGCTGTGAAGGTTGCTGTTCCTCAT3’。PCR扩增(CAG)n序列，PCR反应程序为：95°C预变性2min，进入循环，94°C变性30sec，58°C退火30sec，72°C延伸1min，循环35次，最后72°C延伸1min。1.5％的琼脂糖凝胶电泳，在紫外线灯下观察PCR产物，光学照相记录数据。将预期长短(约280bp)的PCR产物送至北京奥科生物技术有限公司进行测序。使用Chromas软件分析。结果： 1痰瘀结聚型患者的游离睾酮水平和肝郁气滞型患者的睾酮水平均显著高于正常人群，差异具有高度显著性(P＜0.01)。 2痤疮患者雄激素受体基因CAG微卫星片段长度短于正常人群，差异有显著性(P＜0.05)。 3痤疮患者中医分型中肝郁气滞型患者CAG微卫星片段长度短于正常人群，差异有显著性(P＜0.05)。肝郁气滞型患者CAG微卫星片段长度短于痰瘀结聚型患者，差异具有显著性(P＜0.05)。 4痤疮患者雄激素受体CAG微卫星片段长度与患者临床症状轻重没有明显相关性，差异没有显著性(P＞0.05)。
【学位授予单位】：湖北中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R758.733

【参考文献】