CD147高表达于银屑病患者外周血中性粒细胞并诱导中性粒细胞趋化

发布时间：2020-05-05 18:50

【摘要】： 目的 研究CD147分子在银屑病患者和健康志愿者外周血中性粒细胞中的表达,以及CD147siRNA干扰对中性粒细胞模型趋化功能的影响,旨在进一步明确CD147分子在银屑病发病机制和中性粒细胞趋化过程中的作用,为开辟银屑病新的研究领域和治疗方法提供理想的靶分子。 方法 1、收集经临床与病理活检确诊为银屑病患者15例以及性别和年龄相匹配的健康志愿者(Control)15例,银屑病患者病情活动性与严重程度用Psoriasis Area and Severity Index(PASI)积分来评估;抽取外周血用Ficoll密度梯度离心法分离外周血中性粒细胞,Wright-Giemsa染色和台盼蓝拒染实验分别鉴定细胞纯度和活性; 2、分别运用流式细胞仪和免疫印迹法检测银屑病患者和健康志愿者外周血中性粒细胞中CD147的表达水平;用Spearman相关性分析来评估患者PASI积分与其CD147表达间的相关性; 3、用全反式维甲酸(ATRA)诱导人类急性早幼粒白血病细胞株HL-60分化为中性粒细胞(dHL-60)。显微镜观察细胞形态学改变;流式细胞仪检测分化标记分子CD11b的表达;MTT法检测细胞增殖能力的变化; 4、将CD147siRNA1及CD147siRNA2分别电转染至dHL-60细胞中,用空转(blank)和非特异性小干扰RNA(non-specific siRNA)作为对照。采用半定量RT-PCR法和流式细胞仪检测转染前后细胞中CD147的mRNA和蛋白表达水平的变化; 5、运用Transwell系统检测抑制CD147表达对中性粒细胞趋化功能的影响。 结果 1、流式细胞仪和免疫印迹结果显示:与健康对照组相比,CD147分子在银屑病患者外周血中性粒细胞中的表达显著增高(P＜0.001);且CD147的表达与患者PASI积分成正相关(P＜0.05); 2、经ATRA处理96 h后,HL-60细胞的核浆比值明显减小,并出现核分叶和染色质凝聚;CD11b分子的表达显著增高(P＜0.001);细胞增殖能力显著下降(P＜0.001); 3、dHL-60细胞分别转染CD147siRNA1和CD147siRNA2,其中转染CD147siRNA1 24 h后CD147表达的抑制率最为显著(P＜0.001);转染48 h后恢复至接近转染前水平(P＞0.05); 4、转染CD147siRNA1 24 h后,dHL-60细胞向fMLP和IL-8趋化的能力显著降低(P＜0.001)。 结论 1.复制了模拟中性粒细胞的模型,建立了针对其进行siRNA瞬时转染的实验方法; 2.银屑病患者外周血中性粒细胞中的CD147表达增高,且CD147在中性粒细胞的趋化过程中发挥了重要作用。
【图文】：

2.3.1不同siRNA剂量的转染效率分别电转染非特异性荧光标一记siRNAo、2、4、6和8林L(终浓度 <200nM)，4小时后流式细胞仪检测中性粒细胞中阳性荧光细胞数目，，见图3a。选取转染效率最高且低于最小细胞毒性作用的siRNA量8林L为实验最适剂量。1苏 900L豁。口t护夕，，翻q、声)〕2368。。父

本文编号：2650600