间充质干细胞培养上清对小鼠毛发周期的影响的研究

发布时间：2020-05-20 18:05

【摘要】：目的:本研究针对骨髓间充质干细胞培养上清可能对毛囊从休止期进入生长期产生影响展开,建立小鼠动物模型,探究这种影响机制与Wnt信号通路激活的关系。为进一步研究提供方向。研究方法:本研究对骨髓间充质干细胞进行提取和体外培养,在培养细胞的特定时间点获取培养上清。将C57BL/6小鼠随机分为3组,每组10只,分别在背部剃毛区注射BMSCs培养12天上清、培养15天上清或未培养细胞的培养基,隔日注射1次,共处理5次,隔日观察小鼠生存状况及大体皮肤变化,根据小鼠毛囊从休止期进入生长期的速度,选择较快者为最优模型。确定最优模型后,分别在处理后7、10、14天取对应试验组与对照组皮肤组织进行HE染色光学显微镜观察,验证模型建立成功。建模成功后,分别取对应试验组与对照组处理后7、14天皮肤组织,qPCR检测Wnt/β-catenin信号通路关键目的基因mRNA表达水平,对比试验组与对照组间是否存在差异,并应用SPSS20.0统计软件进行数据统计分析,双侧p0.05认为差异有统计学意义。结果:排除麻醉死亡及有明确干扰因素的小鼠3只,共27只小鼠完成建模处理,观察至处理后4周时27只小鼠仍存活。处理后第6天开始,注射BMSCs培养12天上清的试验1组小鼠毛囊最先进入生长期,至第14天共6只小鼠毛囊进入生长期;注射BMSCs培养15天上清的试验2组小鼠从第12天开始毛囊逐渐进入生长期,至第14天共2只小鼠毛囊进入生长期;观察对照组小鼠至处理后第14天,未见小鼠毛囊进入生长期。HE染色显示第7天时试验1组小鼠毛囊进入生长期IIIa阶段,第10天时试验1组小鼠毛囊进入生长期IIIc阶段,第14天时试验1组小鼠毛囊进入生长期VI阶段;第14天时对照组小鼠毛囊仍处于休止期。处理后7天,与对照组相比,试验1组β-catenin mRNA的表达水平较对照组升高,差异有统计学意义;处理后14天,与对照组相比,试验组β-catenin、Lef1、Tcf1 mRNA表达水平较高,差异有统计学意义,抑制因子DKK1 mRNA表达水平在组间无统计学差异,其余所检目的基因mRNA在试验组与对照组间无统计学差异。结论:在小鼠皮内注射小鼠原代BMSCs培养上清可促进小鼠毛囊从休止期加速进入生长期,应用BMSCs培养第12天上清时促进作用更显著,并且对于小鼠生存状态没有明确影响;BMSCs培养上清处理后Wnt/β-catenin信号通路关键影响因子中β-catenin、Lef1、Tcf1 mRNA表达水平升高,而DKK1表达水平不变,提示其影响机制可能与促进Wnt/β-catenin信号通路激活有关。
【图文】：

小鼠,毛囊,对照组

图 3. 处理后 14 天各组小鼠大体观察A：处理前；B：试验 1 组处理后 14 天；C：试验 2 组处理后 14 天；D：对照组处理后 14 天3.2 小鼠皮肤组织 HE 染色观察通过大体观察可明确试验 1 组与对照组间差异大于试验 2 组与对照组间差异，即试验 1 组处理后小鼠毛囊从休止期进入生长期的速度更快，而试验 1 组与 2 组间差异仅在细胞培养上清收取时间点不同，可以认为选择培养原代BMSCs 12 天的培养上清的试验 1 组是最优模型，故选择试验 1 组（以下称“试验组”）方案完成建模，并且与对照组进行后续验证试验。不同时间点每组小鼠选择 3 只进行取材及染色，每个标本观察 20 个毛囊。组织 HE 染色在光学显微镜下观察，结果显示：处理后第 7 天时，试验组毛囊已经进入生长期 IIIa 阶段，表现为真皮变厚，毛囊球部增大，部分突破真皮与皮下组织交界，向下延伸，，毛乳头结构松散，内毛根鞘呈锥形位于其上

小鼠,天图,对照组

图 2. 处理后 7 天各组小鼠大体观察A：处理前；B：试验 1 组处理后 7 天；C：试验 2 组处理后 7 天；D：对照组处理后 7 天图 3. 处理后 14 天各组小鼠大体观察A：处理前；B：试验 1 组处理后 14 天；C：试验 2 组处理后 14 天；D：对照组处理后 14 天A B CD
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R758.71

【参考文献】