应用细胞内PCR技术克隆白癜风自身抗体基因的研究

发布时间：2020-08-31 22:03

　　 白癜风的病因和发病机理尚未完全阐明,有证据表明,抗黑素细胞自身抗体的产生在白癜风的发生与发展过程中起重要作用。受研究方法的限制,迄今对白癜风相关自身抗体基因的认识十分有限。噬菌体抗体库技术是抗体研究领域的重要突破,通过扩增免疫球蛋白基因并使其在噬菌体表面展示而构建抗体库,可以方便地筛选到特异性抗体。然而获得的抗体基因是体外的随机组合,并不是体内原本的轻重链搭配,在自身抗体基因的研究上存在较大的局限性。细胞内PCR(In-Cell PCR)技术可获得亲本配对的抗原结合单位,从而得到编码抗体基因的准确信息,对于自身免疫性抗体的研究具有极广阔的前景。 在本课题中,我们培养了大量正常人的黑素细胞,经相差显微镜观察细胞形态,多巴染色鉴定,保证较高的黑素细胞纯度,将其作为抗原,以活细胞ELISA法和Westonblot法对50余名白癜风患者的血
【学位单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2005
【中图分类】：R758.41
【部分图文】：

第四军医大学硕士学位论文黑素细胞(X10)黑素细胞(x20)图2黑素细胞相差显微镜下形态学观察黑素细胞(x20)黑素细胞(X40)图3黑素细胞爬片多巴染色阳性12血清筛选结果50份白瘫风血清中，29例是1:40阳性，其中1:80阳性的是18例，达到1:160阳性只有7例。这7例患者均为寻常型，从白斑表面积来看，大面积1例，中等面积2例，小面积4例。正常对照只有1:40滴度出现1例。选择这7例抗黑素细胞膜的强阳性glG进行westnoblot检测抗体的特异性。.33特异性血清筛选结果黑素细胞可溶性抗原加入蛋白酶抑制剂

黑素细胞(x20)黑素细胞(X40)图3黑素细胞爬片多巴染色阳性12血清筛选结果50份白瘫风血清中，29例是1:40阳性，其中1:80阳性的是18例，达到1:160阳性只有7例。这7例患者均为寻常型，从白斑表面积来看，大面积1例，中等面积2例，小面积4例。正常对照只有1:40滴度出现1例。选择这7例抗黑素细胞膜的强阳性glG进行westnoblot检测抗体的特异性。.33特异性血清筛选结果黑素细胞可溶性抗原加入蛋白酶抑制剂，经SDS一APGE按其分子量大小予以分离，

10%505一尸AGE。，:标准低分子人黑素细胞抗体的白瘫风血清通滴度阳性血清患者均有阳性条带，条带，白瘫风患者明显高于对照阳性gIG血清的患者的B淋巴

【参考文献】

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3 袁清安,韩素文,俞炜源,孔德清,贺秉坤;细胞内PCR法克隆抗体可变区基因[J];生物技术通讯;2001年02期

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本文编号：2809382